回答下列（一）、（二）小题。

(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：

(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约________的空间。为得到酒精和糖含量较高的果酒，可在果汁中加入一定比例的______。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的_______，使发酵作用尽快发生。

(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得_______的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用_________法。对获得的优质醋杆菌菌种常用划线法接种在固体培养基______上低温保存。

(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是_______

A.发酵前，瓶内酒—冰混合物的pH需调至7.0

B.发酵过程中，充气口要适时适量充气

C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂

D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少

 (二）请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。

(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱  导剂_____作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与________细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的______培养，获得纯系细胞，同时还要进行________检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。

(2)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是________

A.用固体培养基培养          B.用滋养层细胞支持生长

C.能进行传代培养            D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物

(3)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导人到受体细胞，该技术的核心步骤是______________,噬菌体是这些关键基因的___________。

为了给水牛体外胚胎产业化生产中合理使用亚麻酸提供理论依据，科研人员研究了不同浓度的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟、早期胚胎发育的影响，分析回答：

①卵母细胞的收集和体外培养：从屠宰场水牛的卵巢中收集并处理卵母细胞，随机分成5组，分别置于不同浓度亚麻酸的培养液中，在恒温的培养箱中培养22-24h。

②卵母细胞成熟判断：在显微镜下观察卵母细胞，判断其是否成熟，统计结果如表。

③体外受精：在受精溶液中进行体外受精后，用显微镜观察判断是否完成受精。

④早期胚胎培养：将受精卵移入胚胎培养液中培养44-48h后检查分裂情况，每隔48h更换一次培养液，第5-9天观察囊胚发育情况。

如表亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟的影响

（1）步骤①中，细胞培养箱中加5%CO₂的作用是____________。

（2）步骤②中，卵母细胞发育到____________时期才能与获能的精子受精；步骤③中，判断是否受精的依据是____________。

（3）步骤④中，受精卵经过卵裂期、____________（时期）发育成囊胚，培养过程定期更换培养液的目的是____________。

（4）根据实验数据分析，亚麻酸溶液为200μmol·L^-1时，对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育起____________作用（填“促进”、“抑制”）。

（5）将囊胚移植到受体（代孕母牛）子宫内，最终生出的犊牛和受体遗传上有无亲缘关系？____________原因是___________

____________。

用医学手段培育“三亲婴儿”可以解决遗传基因带来的缺陷，其培养过程如图所示．请据图回答有关问题：

（1）由于女性的自然周期产生的卵子太少，捐献者在取卵前需要注射________激素，促使一次有更多的卵泡发育。重组细胞体外培养所需的气体主要是O₂和CO₂，CO₂的主要作用是___________________。

（2）从受精卵到三亲婴儿的培养还需要______和______等技术。三亲婴儿的培育方式属于____________生殖．

（3）三亲婴儿的培育技术______（填“能”或“不能”）避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代。三亲婴儿的染色体______（填比例）来自母亲提供的细胞核．设计试管婴儿技术与为解决不孕夫妇的生育问题而出现的试管婴儿技术主要区别是植入前对胚胎进行_____________________。

下图为单克隆抗体制备流程示意图。

(1)单克隆抗体制备技术的基础是 ____________________________。

(2)细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是______________________。在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的____________________ ，以保证生命活动的正常进行。    

(3)为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞／ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是_______________ 。

(4)若用¹⁵N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序是____________________________________________________。

现有甲、乙两种可能有一定致畸、致癌作用的化学物质，利用动物细胞培养的方法能够鉴定它们是否有毒性，并比较二者毒性的强弱，请完成下列实验报告。

I．实验材料：小白鼠胚胎。

Ⅱ．药品用具：胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、细胞培养箱、载玻片、盖玻片、光学显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片。

Ⅲ．实验原理：________________________________________________，根据这些变异细胞占全部培养细胞的百分数（以下称Q值），可判断该化学物质的毒性。

Ⅳ．实验步骤：

（1）制备细胞悬液：把小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入胰蛋白酶液处理，使胚胎组织离散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬液。

（2）进行细胞培养：

①取标记好的A、B、C三个洁净的培养瓶，______________________________。

②向A、B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙，___________，并将培养瓶摇匀。

③把三个培养瓶放在37℃（适宜温度）的细胞培养箱中培养。

（3）制作临时装片：

①当细胞繁殖到大约第8代左右时，同时从细胞培养箱中取出三个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，使培养的细胞从瓶壁上脱落，再加入动物细胞固定液迅速杀死细胞，将细胞固定在不同的分裂时期。

②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬液。滴在与培养瓶有相同编号的载玻片中央，加1-2滴一定浓度的 __________ 染色，3-5 min后，盖上盖玻片，制成临时装片。

（4）镜检和统计：把临时装片放在显微镜下，寻找处于 _______  期的细胞，并与 小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片对比以确认发生上述变异的细胞，同时统计该期变异的细胞占细胞总数的百分数（Q值）。

V．实验结果：

Ⅵ．实验结论： ___________________________________________

下图为吉林大学农学部奶牛繁育基地成功培育出的一头携带转入赖氨酸基因的克隆牛“织女”的大致过程，请据图回答问题:

中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）能够高效表达外源基因。科学研究中常使用重组CHO细胞（导入了重组载体的CHO细胞）大量生产外源蛋白，一般步骤为：Ⅰ．长期传代培养，获得大量重组细胞；Ⅱ．批式培养，获得大量外源蛋白。

（1）体外培养动物细胞的基本培养液（BM）中除抗生素和一般营养物质外，还应含有_________。为了获得能生产抗体A的重组CHO细胞，需要将含有抗体A基因的重组载体通过__________法导入CHO细胞，经筛选获得重组CHO细胞。

（2）研究发现，酵母抽提物（YE）在动物细胞培养和促进蛋白质表达中具有重要作用。为确定YE在不同培养阶段的使用策略，研究人员进行了下列实验。

①图1所示实验探究了在长期传代培养阶段__________对重组CHO细胞增殖以及抗体A表达量的影响。通过细胞计数和计算得出实验结果如图2所示，结果说明___________。

此处理对后续批式培养中的细胞增殖及单个细胞的抗体产量基本无影响。

②进一步探究YE对批式培养阶段的影响，应在阶段Ⅰ、Ⅱ分别使用________和__________进行培养。结果表明，抗体A的总产量随着YE浓度的提高而增加。

③综上所述，为提高抗体A的总产量，整个培养过程中对YE的使用策略是____________。

    (一)要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种，一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养、并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题：

    (1)对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养，一般用LB培养基，在培养基中为微生物提供碳源、氮源和能源的物质主要是__________，为调节渗透压，要加入一定量的___________。为进行大肠杆菌的分离，还要加入琼脂配制成固体培养基，并进行倒平板的操作。

    (2)获得纯净微生物培养物的关键是_____________________，为此，必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培养器皿和培养基一般采用_____________________法灭菌，接种环采用灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时，除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外，还必须_________________________，以防止空气中的杂菌污染。

    (3)大肠杆菌菌种的扩大培养一般采用液体培养基，接种后将培养基置于37℃摇床振荡条件下培养12小时。菌种的分离时一般在固体培养基上采用____________法，并将培养皿_______________状态。

    (二)科学家将蜘蛛的蛛丝基因导入山羊体内，创造出转基因山羊，使羊奶中含有一种独特的蛛丝蛋白。生产原理如下图。请回答：

    (1)将蛛丝蛋白基因和质粒通过甲过程形成的X物质为_____________。如果选取的受体细胞为体细胞，当在培养过程中出现接触抑制现象时，需要进行____________培养。要使重组细胞具有发育的全能性，乙过程需要的技术操作是____________。

    (2)下列关于丙过程的叙述，正确的是______。

    A．该过程为动物细胞培养，目的是获得更多的重组细胞

    B．该过程所用培养液的成分往往是相同的

    C．该过程在无菌条件下进行，需要提供CO₂来调节pH

    D．通过现代生物技术可以将重组细胞在体外培养成山羊个体

    (3)为了快速繁殖转基因山羊，还可在丁过程前对早期胚胎进行____________，经培养后再分别移植到____________________的代孕母羊的相应部位。

（1）若分离以尿素为氮源的细菌。在含有___酶的细菌菌落周围会出现，这是由于尿素被分解产生的氨气使PH升高，______指示剂产生颜色变化。采用______法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期,降低生产成本和提高生产效率。

(2)亚硝酸盐测定原理:亚硝酸盐可与________________发生重氮化反应.这一产物再与____________________偶联,形成__________色产物。

（3）获得目的基因，获取已知目的基因序列用化学方法合成或_________________

基因工程的核心:通常用_________________分别切割目的基因和载体DNA，然后用________将目的基因和载体DNA连接在一起,形成重组DNA分子。

（4）卵巢经超数排卵处理后，要使用__________________确定卵泡的位置。     

 科研人员单独培养胚胎干细胞，首先需要在培养皿底部制备一层______细胞，称为饲养层。 利用动物细胞培养技术中的细胞具有________________和__________________的特点可用烧伤患者自身的健康皮肤细胞培养出大量自身薄层皮肤细胞，用于移植。

（5）植物克隆和动物克隆共有的培养方法是_______

A.原生质体培养、传代培养     B.贴壁培养、传代培养 

C.器官培养、愈伤组织培养     D.悬浮培养、器官培

苦马豆素(SW)最早是从植物灰苦马豆中分离获得,为了研究SW是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用,学者做了大量研究,相关实验过程及结果如下:

① 取小鼠肝癌Hepal-6细胞;

② 制成单细胞悬液,等量接种于多孔板,加入等量细胞培养液,每组设5个平行孔;

③ 于37℃、5%CO₂培养箱中培养24 h;

④ 加入等量不同浓度的SW溶液,于37℃、5%CO₂培养箱中培养;

⑤ 分别在24 h、48 h、72 h时摇匀后吸取培养液,观察并记录结果,得到不同浓度的SW对细胞存活率的影响曲线,如图所示;

⑥ 将培养48h的培养液离心,细胞染色,在荧光显微镜下观察拍照,记录癌细胞和凋亡细胞的数目,并采用免疫荧光细胞技术检测细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达量状况,汇总统计结果见下表。

培养48h后细胞数目及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达水平

注:“+”的数量表示相对值的大小。

请回答下列问题:

(1) 实验中进行小鼠肝癌Hepal-6细胞培养的原理是____。培养箱中要有适量的无菌空气,原因是______________。肝癌细胞数量增多扩展时,细胞能相互重叠向三维空间发展,形成堆积物,可能的原因是________。 

(2) 实验步骤③中“于37℃、5%CO₂培养箱中培养24h”的目的是____________。 

(3) 分析图中曲线可知,SW对肝癌Hepal-6细胞的作用效果是____________________________________________。 

(4) 表中结果表明SW可以诱发细胞____,从而抑制肿瘤细胞生长。从两种蛋白质的表达水平来看,Bax蛋白和Bcl-2蛋白对癌细胞凋亡的作用分别是________。