下面是畜牧业生产上培育某种优良种牛的两种方法，请分析回答:

（1）方法Ⅰ和方法Ⅱ均用到的生物技术有               和                。

（2）用激素处理的目的是使B牛                ，从B牛体内获得的卵母细胞需要培养到        (时期)才能与精子结合。

（3）A牛的精子必须在B牛的生殖道中经过相应的生理变化后，才能与B牛的卵细胞结合，完成受精作用，这个过程叫          。卵子受精的标志是在卵细胞膜和透明带的间隙能够观察到          。

（4）生产上常用             期的胚胎进行胚胎移植。若希望同时获得多个性状相同的家畜个体，可以使用           技术。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①的技术名称是                         。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有                 。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的                       。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取                   作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，能否使用SmaI,并说明原因是                                        。

为进行牛胚胎移植，可通过下列途径获得优良胚胎，请回答相关问题：

(1)在途径①中，为一次性获得数目较多的胚胎，可对优良母牛注射________。体内受精一段时间后，可通过________操作收集早期胚胎用于移植；若进行体外受精，应使用培养到____  ____的卵母细胞。

(2)在途径②中，以成熟体细胞为供体进行核移植成功率很低，而以胚胎细胞为供体成功率会显著提高，原因是________。在途径③中，将目的基因导入受精卵常用的方法是________；若用DNA分子杂交技术检测导入是否成功，需以____    ____为模板制作探针。

(3)优良胚胎移植前需培养到____  ____时期，且受体母牛需处于_______  _状态。

长期以来优良种畜的繁殖速度始终是限制畜牧养殖业发展的瓶颈，近年来发展起来的细胞工程技术和胚胎工程技术为优良种畜的快速繁殖带来了无限生机。下面是快速繁殖良种奶牛的两种方法，请据图回答：

(1)在试管牛E和克隆牛G的培育过程中都必须用到的两项技术是动物细胞培养和 _________。

(2受精过程中阻止多精入卵的生理反应有___________________________________。

(3)科学家将人的α—抗胰蛋白酶基因传入上图的重构卵中，选择重构卵做为受体细胞的原因是_________________________________________。 

(4)克隆牛G的性别是         ，试管牛E的性别是           。

(5)培养出的克隆牛G几乎是_____________牛的复制品。这是因为________________。 

(6)为大量获得试管牛E，可将早期胚胎进行分割后移植，分割所选的胚胎应是_______，分割时要注意将_______________均等分割，以保证分割后的胚胎能正常发育。

下面是绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图同答:

（1）分析可知，科学家获取绿色荧光蛋白基因所运用的限制酶是图中所示的________，最终获得的绿色荧光蛋白基因的末端类型属于_________________。

(2)图示工程中，将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞的过程③称为_________，常用的方法是_______________。

(3)图示中，作为受体细胞的去核卵母细胞一般处在_______________期，常通过______(物理方法)进行激活，使其完成减数分裂和发育进程。

(4)培养图示重组细胞时，将细胞所需的营养物质按其种类、数量严格配制而成的培养基称为____________培养基。通常在培养基中还需要加入适量的___________等天然成分通入氧气主要作用是____________________________。

为进行牛胚胎移植，可通过下列途径获得优良胚胎，请回答

(1)在途径①中，为一次性获得数目较多的胚胎，可对优良母牛注射       。体内受精一段时间后，可通过          操作收集早期胚胎用于移植；若进行体外受精，应使用培养到        的卵母细胞。 

(1)图中①、②所示的结构分别是___________、________________，④过程常用的方法是___________。

(2)图中③、⑤所示的生物工程技术分别是             、            ，利用___________技术快速扩增健康胰岛B细胞基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在          酶的作用下延伸形成DNA，该技术的原理是__________________。

(3)过程④通常用②做受体细胞的原因是____________________________________。

(4)图示治病的方法叫做______________，与一般的异体移植相比最大的优点是 ______________________。