以下为人工合成 reAnti 基因，转入猪成纤维细胞，做成转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

（1）基因工程的核心是 ________  (用序号回答）

（2）基因工程基本工具之一的限制酶主要从原核生物中分离纯化出来，大多数限制酶的识别序列是由________个核苷酸组成。                                  

（3）在基因工程中使用的载体除质粒外，还有________、噬菌体衍生物等。

（4）目的基因进入受体细胞，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为 ________。                                                                                                                                  

（5）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞后，要通过 DNA 分子杂交技术，  来检测reAnti基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的________上。

（6）从猪中取胎儿成纤维细胞，用胰蛋白酶处理，然后进行分散培养。多数细胞生存的适宜 PH 范围是________。

（7）去核前的卵母细胞应培养到________期。其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞，再利用物理或化学方法刺激，使之完

成细胞________，在体外培养成重组早期胚胎。

（8）在进行过程⑦操作前，应用激素对受体母猪进行__________处理。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

回答下列问题

（1）据图推断,该团队在将甲插入质粒P0时,使用了两种限制酶,这两种酶是______,使用这两种酶进行酶切是为了保证 ______，也是为了保证______。

（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后,若在该细胞中观察到了绿色荧光,则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了_____和______过程。

（3）为了获得含有甲的牛,该团队需要做的工作包括:将能够产生绿色荧光细胞的_____移入牛的______中、体外培养、胚胎移植等。

（4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中,某同学用PCR方法进行鉴定,在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的______（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。

图2

(1) 图1中构建的重组表达载体,目的基因的上游应有____,它是____酶识别和结合的部位,驱动基因的转录。 

(2) 在图1过程③中,用____激素处理以获取更多的卵(母)细胞,这些卵(母)细胞需在体外培养到_______期,方可进行过程④的操作。 

(3) 图1中过程④采用的生物技术是______,得到的重组细胞发育为早期胚胎后,可通过____技术获得较多胚胎。 

图3

“三亲婴儿”技术是指取出患病母亲卵子的细胞核，导入女性捐赠者去核的卵子中，再将重构的卵子和父亲的精子结合。下列有关“三亲婴儿”的叙述中，错误的是

干扰素是抗病毒的特效药，干扰素基因缺失的个体，免疫力严重下降。科学家设计了以下流程，利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失的患者进行基因治疗。根据所学的知识，结合图中相关信息，回答以下问题：

(1)图中进行的是________(填“体内”或“体外”)基因治疗，该过程利用的生物工程技术手段有动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、转基因技术和________等。

(2)ES细胞是由早期胚胎或________中分离出来的一类细胞，利用其具有________ 性，可以将其培养成人体各种组织器官。

(3)步骤③中，需要构建含有干扰素基因的________，该结构除了复制原点外，至少包含____________________和干扰素基因等，为检测干扰素基因是否表达，可以采用____________________的方法。

(4)为了快速获得更多的目的基因常常采用________技术进行扩增。

（1）胚胎干细胞是从动物胚胎发育至_________期的内细胞团或胎儿的_____中分离得到的一类细胞。

（2）图中分化程度最低的干细胞是______。在体外培养条件下，培养液中加入_________因子，可诱导该种干细胞向不同类型的组织细胞分化。

（3) 在机体内，皮肤干细胞分化成皮肤细胞是机体细胞中基因________的结果。

（4）某患者不能产生正常的白细胞，通过骨髓移植可以达到治疗的目的，骨髓的治疗的实质是将上图的______________细胞移植到患者体内。

（5）若要克隆某种哺乳动物，从理论上分析，上述红细胞、白细胞神经细胞中不能选用作为供体的细胞是成熟的___________，其原因是___________。

（6）若某药物可抑制肝肿瘤细胞DNA的复制，使用该药物可使肝肿瘤细胞停留在细胞周期的______________期。

（7）在制备单克隆抗体过程中的细胞融合阶段，用__________细胞与骨髓细胞融合，经多次筛选最终得到能分泌__________________的杂交瘤细胞。

在克隆牛的过程中，需先将甲牛的去核卵母细胞与乙牛体细胞的细胞核融合形成重组细胞，将此细胞培养至胚胎发育的早期，然后移入代孕母牛的体内，最后可得到克隆动物。下列有关叙述，错误的是

利用基因工程技术，可以使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”。科研人员通过乳腺生物反应器生产人凝血因子Ⅸ医用蛋白，其技术路线如图所示。请回答下列问题：

(1)基因工程的第一步是获取目的基因。目的基因可以从自然界已有的物种中分离，也可以人工合成。可以通过________技术扩增目的基因。利用该技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有________、____________、4种脱氧核糖核苷酸和模板(人凝血因子Ⅸ基因)。

(2)图中过程①为基因工程的核心，则A表示的结构是________。将A导入绵羊胎儿成纤维细胞的常用方法是________________。筛选整合有目的基因的成纤维细胞时，常用的检测方法是____________。

(3)欲获得绵羊胎儿的单个成纤维细胞，可用________酶处理绵羊组织块。图中所用的去核卵母细胞一般处于____________期。

(4)进行胚胎移植时，代孕母羊需要注射激素，以实现____________。