中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）能够高效表达外源基因。科学研究中常使用重组CHO细胞（导入了重组载体的CHO细胞）大量生产外源蛋白，一般步骤为：Ⅰ．长期传代培养，获得大量重组细胞；Ⅱ．批式培养，获得大量外源蛋白。

（1）体外培养动物细胞的基本培养液（BM）中除抗生素和一般营养物质外，还应含有_________。为了获得能生产抗体A的重组CHO细胞，需要将含有抗体A基因的重组载体通过__________法导入CHO细胞，经筛选获得重组CHO细胞。

（2）研究发现，酵母抽提物（YE）在动物细胞培养和促进蛋白质表达中具有重要作用。为确定YE在不同培养阶段的使用策略，研究人员进行了下列实验。

①图1所示实验探究了在长期传代培养阶段__________对重组CHO细胞增殖以及抗体A表达量的影响。通过细胞计数和计算得出实验结果如图2所示，结果说明___________。

此处理对后续批式培养中的细胞增殖及单个细胞的抗体产量基本无影响。

②进一步探究YE对批式培养阶段的影响，应在阶段Ⅰ、Ⅱ分别使用________和__________进行培养。结果表明，抗体A的总产量随着YE浓度的提高而增加。

③综上所述，为提高抗体A的总产量，整个培养过程中对YE的使用策略是____________。

如图所示为动物细胞培养过程中,动物细胞增殖情况的变化曲线（图 中 B、D 两点表示经筛选后继续培养）,据图回答问题。

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（ 1 ） OA 段 的 培 养 称 为_________________________________培 养 ， AB 段 可 能 发 生 了_______________________________现象，需要用_______________________________酶处理使组织细胞分散开来。

（2）动物细胞培养和植物组织培养过程中，就细胞增殖、分化来说，动植物细 胞都要进行_______，不同的是植物细胞还要进行____________。

（3）为制备单克隆抗体，需将_______________________________注射到小鼠体内，以此获取相 应的 B 淋巴细胞，同时可选取图中_____________________________________________________________________________________点以后的细胞与该细胞融合 形成杂交细胞。这种杂交细胞的特点是___________________________________________________________________________________________。

（4）在制备单克隆抗体的过程中，需要经过两次筛选，第一次是诱导融合之后筛选出_______________________________细胞，第二次是筛选出_______________________________细胞。

甲、乙两种化学物质可能有一定致畸、致癌作用，利用动物细胞培养的方法鉴定它们是否有毒性，并比较二者毒性的强弱。请依据实验结果完成下列实验报告。

Ⅰ．本实验的自变量是______________。

Ⅱ实验步骤：

（1）制备细胞悬液：用胰蛋白酶处理小白鼠胚胎组织离散成单个细胞，制成细胞悬浮液。

（2）进行细胞培养：

①取A．B．C三个洁净的锥形瓶，分别加入_____________。

②向A．B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙，并将培养瓶摇匀；C瓶不作处理，作为对照。

③把3个培养瓶放在37℃的CO₂培养箱中培养。

（3）制作临时装片

（4）镜检和统计：把临时装片放在显微镜下，寻找处于____期的细胞，与小白鼠_____有丝分裂高倍显微镜照片进行对比，以确认发生变异的细胞。统计该期变异的细胞占细胞总数的百分数。

Ⅲ．实验结果：

IV．请写出实验结论：___________________。

细胞培养已经成为生物化学、医学、制药等领域研究和生产不可缺少的技术。回答下列有关动物细胞培养的问题。

(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的_________。

(2)在动物细胞培养过程中，首先要保证无菌、无毒的环境，对培养液要进行无菌处理外，通常还要在细胞培养液中添加一定量的__________，作用是__________________。动物细胞培养还需要的其他条件是___________、____________、____________。

(3)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现____________________的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成________细胞，该种细胞的黏着性________，细胞膜表面的糖蛋白的量________。

(4)检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到________期的细胞用显微镜进行观察。

骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一。科研人员研究曲古抑菌A（TSA）对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制，为临床治疗寻找新方向。实验过程如下：

步骤1 用含青霉素和链霉素的高糖培养基，在37℃、5% CO₂培养箱中培养人骨肉瘤细胞一段时间。

步骤2 取适宜浓度的处于生长旺盛期的人类骨肉瘤细胞，用加入不同浓度的TSA（0～200 ng·mL^-1）的培养基继续培养24h。

步骤3 对各组细胞进行抽样检测，检测方法是先用台盼蓝试剂（一种细胞活性染料）染色再用血细胞计数板计数，统计细胞存活率（未染色细胞数/细胞总数×100%），结果如图1。

步骤4 分别提取TSA浓度为0 ng·mL^-1、25 ng·mL^-1、50 ng·mL^-1处理的3组细胞，测量细胞中与凋亡相关的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌动蛋白基因（不同的组织细胞中表达相对恒定）表达的蛋白质量并计算比值，结果如图2。分析回答：

（1）与正常成骨细胞相比，骨肉瘤细胞容易在体内分散和转移，其主要原因是                            。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是                     ，细胞培养箱中保持5% CO₂的作用是                  。

（2）步骤2中，设置0 ng·mL^-1 TSA实验的主要目的是                         。

（3）用台盼蓝试剂检测细胞活性的主要原理是                                  。

（4）图1所示结果表明                                  。

（5）根据图2判断，骨肉瘤细胞中          基因过度表达会加速细胞凋亡。