某同学按下表所示制成临时装片进行有关实验。

将上述各组实验材料按表中实验条件进行相关处理后，制成临时装片，放在显微镜下观察，分析回答：

（1）上述实验中需要的材料用具除显微镜外，还需刀片、镊子、滴管、吸水纸、____。

（2）A组实验的目的是____；50%酒精的作用是____。

（3）B组实验的X染液是____，显微镜下看到的线粒体呈____色。

（4）在C组实验中，要选取菠菜叶稍带些叶肉的下表皮，原因是_________________________________________________________________。

（5）在E组实验中，显微镜下看不到质壁分离现象，原因是______________________________。

回答下列(一)、(二)小题：

    (一)牛奶是微生物生长的良好培养基。生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况，也影响奶制品的运输和贮藏；牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物。

    (1)为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10 mL生牛奶稀释到10^－4浓度后，取0.1 mL滴在培养基上。

    ①将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是_______________。

    ②该涂布工具最合适的灭菌方法是_______________________。

    (2)图中所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为______个。

    (3)消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释平板法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动?______________________。

    (4)涂布结束后将培养皿______，在37℃______________中培养。

    (5)细菌种群进化过程中，起主要作用的变异是______。

    A．环境条件    B．基因重组    C．基因突变    D．染色体变异

    (二)兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转移入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

    (1)从兔肝细胞中提取mRNA，在_________酶的作用下形成互补DNA。然后以此DNA为模板在体外利用____________反应大量扩增，得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成___________，再导入用氯化钙处理的_______________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是________________(A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织  B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽  C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根  D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株)。

    (2)取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于__________上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是__________，从而使叶片保持正常形态。

(1) 由杂种细胞D培育成白菜—甘蓝植株,采用的技术手段是______,该过程说明植物细胞具有____。 

(2) 在d过程培养中,培养基的成分通常包括水、____、有机营养和____等,同时,在培养过程中,除必要的温度、光照和氧气等外界条件外,成功的另一个关键是操作过程中必须保证____。 

(3) 要获得图中白菜和甘蓝的原生质体,首先需要分别除去白菜和甘蓝细胞的细胞壁。现提供以下材料和用具:紫色洋葱鳞片叶、适宜浓度的蔗糖溶液、纤维素酶和果胶酶、蒸馏水、镊子、显微镜、载玻片等。请从中选择合适的材料,完成下面检验是否已除去细胞壁实验的方法步骤,并预测和解释实验结果。

主要实验步骤:

① 选取适宜浓度的蔗糖溶液,加入适量纤维素酶和果胶酶配制成的细胞壁分解液。其中选取适宜浓度的蔗糖溶液而不用蒸馏水的理由是:适宜浓度的蔗糖溶液____。 

② 检验细胞壁分解液除去细胞壁的方法。

第一步:用镊子撕取一小块紫色洋葱鳞片叶放在载玻片中央,滴加适量细胞壁分解液,制成临时装片,得到实验组装片。

第二步:__________。 

第三步:__________。 

结果预测和分析:__________。 

在进行植物体细胞杂交时，首先需要去除细胞壁。现提供以下材料和用具：白色洋葱鳞片叶、紫色洋葱鳞片叶、适宜浓度的盐酸、适宜浓度的蔗糖溶液、纤维素酶、果胶酶、蒸馏水、镊子、显微镜、载玻片、盖玻片等。请你从中选取合适的材料配制成合理的细胞壁分解液，设计实验检验其除去细胞壁的效果，并预测和解释实验结果：

（1）实验步骤：

①首先选取________，配制成细胞壁分解液。这样选取的理由是______________________________________________________。

②检验细胞壁分解液除去细胞壁效果的步骤：（注意对照组的设置）

第一步：______________________________________________；

第二步：______________________________________________；

第三步：______________________________________________。

（2）实验结果的预测和解释：________________________________________________。

　　　表　亲本及融合子细胞体积和DNA含量的比较

(1) 步骤一:制备原生质体。培养C1、M1单倍体亲株,加入一定量的0.5%的蜗牛酶液,保温处理一段时间,在一定浓度的高渗缓冲液洗涤,以确保获得更多的原生质体。

①本实验中,蜗牛酶液的作用是_。 

②在无菌条件下,用____(A:高渗缓冲液、B:低渗缓冲液、C:生理盐水)洗涤,以确保获得更多的原生质体。 

③改变蜗牛酶液浓度进行多组实验,结果见图1,分别计算酶浓度为1和1.5时的形成率与再生率,相比较酶浓度为____时更适宜。 

(2) 步骤二:诱导原生质体融合。取C1、M1原生质体悬浮液等量混合,离心去除上清液,加入一定量40%的____溶液,30 ℃保温20 min,镜检并观察融合情况。 

(3) 步骤三:融合子的鉴定。测定细胞体积及DNA含量,结果见表1,从中挑选出融合子Z13、Z15、Z19、Z29,理由是__________________。 

图3　融合子Z29与亲株总酸降解能力的比较

细胞融合技术有着广泛应用。下图为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题

（1）若a、b分别是基因型为yyRr和YYrr两个玉米品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上。科学家分别将它们的花粉除去细胞壁，然后诱导其融合，再把这些融合细胞进行培养，培育出了玉米新品种。

 ①这两个品种的花粉可用化学诱导剂诱导融合，共可产生___________种基因型的融合细胞（仅考虑两两融合），这些融合细胞经过____________技术可以得到玉米新品种。

 ②若想培育出基因型为yyRR的玉米植株，也可直接用yyRr植株的花粉培养得到__________幼苗，再经过__________处理并筛选获得，这种方法叫做________。

（2）若a、b表示番茄和马铃薯两种植物的体细胞，a、b细胞融合之前，要纤维素酶和果胶酶酶处理后得到_________________；诱导植物细胞融合的化学方法是_________________。

（3）若a、b分别为骨髓瘤细胞和已免疫的B淋巴细胞，请据图回答：

  ①为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的d细胞，其特点是_________。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有_______________________等特点。

   ②下列各图表示单隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来_______________。

洋葱是常用的实验材料,它的叶分为两种,管状叶伸向空中,能进行光合作用,鳞片叶层层包裹,富含营养,如图1所示。回答下列问题:

(1)观察植物细胞的质壁分离和复原所用的最佳实验材料是____________。该实验的自变量是____________。

(2)观察DNA、RNA在细胞中的分布所用的最佳材料是_____________，该材料优于其他部分的原因是_______。

(3)若观察植物细胞的有丝分裂,所用的理想材料为________。如果在观察细胞有丝分裂实验中的光镜下看到的细胞如图2所示,造成这种情况的原因可能是_________。

①取材位置不合适　②取材时间不合适　③制片时压片力量不合适　④解离时间不合适　⑤视野选择不合适

(4)如果进行叶绿体色素的提取,则可以用________作实验材料。

下图为某学生进行某实验的基本操作步骤，请回答下列有关问题：

（1）你认为他做该实验的目的是_____________________________。

（2）B步骤主要观察洋葱鳞片叶表皮细胞中紫色___  ____的大小以及         的位置。

（3）请描述C步骤的操作方法：                                          。

（4）某学生在F步骤观察时，发现质壁分离不能复原，最可能的原因是______________。

（5）通过实验发现，蔗糖溶液浓度不适宜会造成实验失败。请据此拟定一个相关的研究课题：                                                             。

紫色洋葱是生物学中常用的实验材料，如图所示紫色洋葱的叶分两种：管状叶伸展于空中，进行光合作用；鳞片叶层层包裹形成鳞茎，富含营养物质。以紫色洋葱为材料进行如下实验：

（1）若用管状叶做实验材料，叶绿体中的色素分布在叶绿体的_______上。提取叶绿体中的色素使用的试剂是____，分离色素的方法是_________，分离得到四种色素中溶解度最大是_________。

（2）观察质壁分离及复原所用的最佳材料是____________。

（3）若观察DNA、RNA在细胞中的分布状况，选用材料为_____，利用________将细胞染色，可以显示DNA、RNA的分布。

 C．液泡颜色变浅      D．细胞核位于原生质层内．