如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点．据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________________（限制酶）同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含__________的培养基上进行。
（2）过程②代表的生物技术是__________，此技术对供体母牛、代孕牛进行选择后，并用激素进行的处理是_____________。如对囊胚阶段的胚胎进行切割，应注意____________________，以免影响胚胎的恢复和进一步发育。
（3）若转基因牛的乳汁中不含人乳铁蛋白，根据中心法则分析，其可能的原因是_______________________________。

为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法，请根据图示回答下列问题。

(3)在受精的过程中，精子入卵后会立即发生一种反应叫_______反应，以防止多精入卵受精。判断卵子是否受精的标志通常是______________________。

(4)要培育高产奶率的转基因牛，如建立生产生长激素的乳腺生物反应器，科学家要将___________和乳腺蛋白基因的启动子、终止子重组在一起，通过显微注射等方法导入牛的受精卵中。受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

(5)“试管牛”的形成用到的生物技术有____ (填序号)

①早期胚胎培养   ②体外受精   ③胚胎移植   ④核移植

(6)早期胚胎中的胚胎干细胞，不仅可以应用于哺乳动物胚胎性别鉴定，还可应用于治疗人类的某些疾病，如老年痴呆症、糖尿病等； ES细胞体外诱导分化培育出人造组织器官用于_______、研究体外细胞分化等领域。 

  (1)核移植的受体细胞一般选用____________________________________细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出细胞核和__________。

  (2)细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件、适宜的温度和pH、气体环境外，还需要有无菌、无毒环境，为保证无菌、无毒环境，在培养液中通常要加入__________。此外，还应定期__________。以便清除代谢废物。

  (3)现有一段人工合成的正常胰岛素基因的脱氧核苷酸序列，可利用PCR技术扩增正常胰岛素基因，该技术的原理是______________。将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞通常采用________法。

  (4)“定向诱导”的本质是_____________________________________________________。

（1）哺乳动物的体外受精主要包括[a]_____、[b]______和受精等几个主要步骤。若要充分发挥优良母畜的繁殖潜能，可给供体注射________，使其排出更多的卵子。

（2）通过过程c构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_______识别、结合位点。d过程常用的方法是_________。

（3）e过程的名称为_________，其实质是________________________。若要一次获得多只完全相同的转基因牛，应采用胚胎分割技术，通常选择发育良好、形态正常的_________或桑椹胚。

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。

(2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

(3)步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的_______设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有___________酶的酶切位点。

(4)为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

科学家将人的生长激素基因与质粒重组后，导入牛的受精卵，并成功从牛奶中提取到了人生长激素，操作流程如下图所示，请据图回答。（已知限制酶I的识别序列和切点是－G↓GATCC－，限制酶II的识别序列和切点是－↓GATC－）。

       （1）获取目的基因的主要途径包括从已有物种细胞中提取和_____________。

       （2）据图分析，在构建重组质粒的过程中，目的基因用________________（填“限制酶I”或“限制酶Ⅱ”）进行了切割。

       （3）获能的精子和卵细胞相遇后首先发生____________反应，之后精子接触卵黄膜，并进一步与卵结合，在该过程中，_______________和____________________可以防止其它精子入卵。

       （4）图中“受体”是__________________________；“符合要求的个体”是指_____________________________。

       （5）将牛受精卵进行人工培养后，一般可选择__________________期的、发育良好的胚胎进行移植。

下面是畜牧业生产上培育某种优良种牛的两种方法，请分析回答：

(1)方法Ⅰ和方法Ⅱ均用到的生物技术有________________和__________________。

(2)用激素处理的目的是使B牛__________，从B牛体内获得的卵子需要培养到________________________(时期)才能与精子结合。

(3)A牛的精子必须在B牛的生殖道中经过相应的生理变化后，才能与B牛的卵子结合，完成受精作用，这个过程叫____________。卵子受精的标志是在卵细胞膜和透明带的间隙能够观察到______________。

(4)生产上常用__________期的胚胎进行胚胎移植。若希望同时获得多个性状相同的家畜个体，可以使用________技术。

（1）图中的单倍体囊胚1最可能是由小鼠的________发育而来，所采用的技术应为________，培养过程中使用的培养液除含有一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、________等营养成分以及血清等物质。

（2）图中的单倍体ES应取自囊胚的________细胞，ES在形态上表现为________。

（3）由于物种间存在________，因此自然情况下哺乳动物远亲物种问的配子往往无法完成________作用，或者即便能完成也不能发育，但是人们为了生物学研究的便利，创造出了各类远亲物种间的杂合细胞，如小鼠一大鼠、人—鼠等杂交细胞，由于这些细胞都是由体细胞融合产生，因此杂交细胞中通常含有________个染色体组。

【选修3-现代生物科技专题】

为治疗糖尿病，研究人员提出了如下图的方法。

（1）一般选用的图中①都是_____________的供体细胞。

（2）核移植的受体细胞一般选用MⅡ期卵母细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出_____________。  

（3）细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件、适宜的温度、pH和气体环境外，还需要有_____。上图所获的胚胎干细胞可由________中分离出来，在功能上具有________。

（4）利用PCR技术扩增正常胰岛素基因的前提条件是___________。将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞并维持稳定和表达的过程，称为_____。

（5）“定向诱导”的目的是使重组细胞B发生_________，从而形成功能专一的胰岛类似细胞。

（6）该治疗糖尿病的方法与相比异体移植，突出的优点是________。