下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答:

(1)获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和                        。

(2)获取目的基因还可以使RNA 形成cDNA。获得目的基因可以通过            技术大量扩增。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含                         的培养基上进行。 

(3)图中质粒除了所示结构以外，还必须含有 才能构成一个完整的基因表达载体。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是图中的         。 

(4)过程①可采用的操作方法是 。 ②过程表示        。 

(5)为检测人乳铁蛋白是否成功表达,可采用               技术。 

[生物——选修3：现代生物科技专题

I.白菜与甘蓝均为二倍体，染色体数分别为20与18。科学家利用植物体细胞杂交技术培育出的“白菜—甘蓝”，具有生长期短、耐热性强和易于储藏等优点。回答下列问题：

(1)为了培养“白菜—甘蓝”，可取两者的叶片，先用________________酶去除细胞壁，获得具有活力的__________，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成_愈伤组织，然后经过再分化形成完整的杂种植株。

(2)白菜、甘蓝有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是在减数分裂过程中前者____________异常而后者正常。

(3)这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的____________等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。

II.下图表示用基因工程与胚胎工程培育良种牛的过程，请据图回答下列问题：

(1)④表示基因工程中______________________过程。

(2)良种奶牛用促性腺激素处理的目的是____________。

(3)图中A指______________，B指______________。

(4)如果转基因牛D的牛奶中含有________________，则说明血清白蛋白基因在个体水平已表达成功。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

干扰素是抗病毒的特效药，干扰素基因缺失的个体，免疫力严重下降．可利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失的患者进行基因治疗，根据所学的知识，回答以下问题：

（1）ES细胞是由早期胚胎或________中分离出来的一类细胞，具有________性，可以将其培养成人体各种组织器官．

（2）为了快速获得更多的干扰素基因，常常采用________技术进行扩增．构建含有干扰素基因的表达载体时，该结构除了复制原点外，至少包含________和干扰素基因等；为检测干扰基因是否表达，可以采用________的方法．

（3）将含有干扰素基因的表达载体导人胚胎干细胞时，最常用也最有效的方法是________．

（4）使用培养基培养含有目的基因的胚胎干细胞肘，为防止培养过程中杂菌污染，通常要在细胞培养液中添加一定量的________培养过程中通常采用培养皿和松盖培养瓶，将其置于含________的混合气体的培养箱中进行培养．

为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法，请根据图示信息回答

（1）试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的细胞工程技术有                 。方法Ⅱ为什么要用卵母细胞做受体细胞？                                       

（2）产生E牛的过程，对B牛和D牛要进行          处理。产生F牛的理论依据是          ，其生殖方式属于           。E牛和F牛的性别分别为           。

（3）解释F牛的遗传性状与D牛不同的原因                                                    。

（4）在受精的过程中，卵子是否受精的标志是                                                。

（5）体细胞进行体外培养时，所需的气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是                   。若要获得ES细胞，可以来自于囊胚中的          。

请回答有关下图的问题：

                                                                        图1                                                                                                      图2

(1)图1中①～⑤所示的生物工程称为蛋白质工程。该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对________的修饰或合成，对现有蛋白质进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。

(2)图1中④所示过程叫作________，该过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是________(请将模板链上的碱基写在前面)。

(3)如图2所示为一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，在基因尾端还必须有[2]________；图中[3]________的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。

(4)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，图2中序号[1]代表的是乳腺蛋白基因的________；且在图1中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含性染色体______的精子。

(5)为获得较多的受精卵进行研究，图1中⑥过程一般用激素对供体做________处理；为提高培育成功率，进行⑩过程之前，要对供、受体动物做________处理。若图1中的卵母细胞来自从屠宰场收集的卵巢，则其在⑧之前需进行体外培养，到________期方能进行受精。

(6)用________技术处理发育到________期或囊胚期的早期胚胎，可获得同卵双胎或多胎。若是对囊胚进行处理，则要注意将________均等分割。

2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来       ，理由是：                                                                  。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是              。

（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是          。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是，可以避免                。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：      （用数字表示）。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）

④表达出蓝色荧光蛋白。

 （1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：第一步是目的基因的获取，第二步是基因表达载体的构建，第三步是将目的基因导入受体细胞，第四步是          ▲         

①通常在第一步和第二步的操作中需要相同的工具酶是          ▲           

②利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在   ▲     酶的作用下延伸形成DNA。

③采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞后，培养该细胞再生成植株的过程中，往往需要使用植物激素，人为地控制细胞的           ▲          。

④如果转基因植物的花粉中含有毒蛋白，将引起的安全性问题包括     ▲            （多选）。

    A．生物安全  B．环境安全    C．食品安全    D．伦理道德问题

⑤蛋白质工程的基本原理是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的        ▲            序列，所以蛋白质工程实质是对基因直接操作的。

（2）请回答下列有关单克隆抗体制备的问题：

①与动物细胞融合过程相比，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用    ▲      ，以获得原生质体。

②骨髓瘤细胞和产生免疫反应的动物的脾脏细胞中的B淋巴细胞融合时，由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行            ▲        ，且要适时克隆化培养。

（3）请回答下列有关胚胎工程的问题：

   ①在胚胎移植过程中，供、受体母牛选择好后，要用激素进行同期发情处理的原因是       ▲        ，

     以保证移植的胚胎能够继续正常发育。

   ②人类的胚胎发育过程中，细胞分化开始于    ▲        阶段。

&;    人的血清白蛋白(HSA)在临床上需求量很大，通常从人血中提取．如果应用现代生物技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就成为可能．其大致过程如下：

（1）②过程使用                 酶，③表示               技术．基因工程的核心是过程           （填序号），其中人血清白蛋白基因首端必需含有                  。

（2）图中方法C是                  。鉴定人血清白蛋白基因是否成功在转基因牛体内表达的方法称为___________。

（3）该图示培育良种牛的过程中用到的胚胎工程技术有                     。（至少两项）

（4）乳汁保存和运输条件相对较高，而奶酪便于保存和运输，预将转基因牛D分泌的乳汁制成奶酪，需要一种关键性酶——凝乳酶．研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍．通过蛋白质工程生产高效凝乳酶，所需步骤有___________。

 a． 蛋白质的结构设计                  b． 蛋白质的结构和功能分析

 c． 蛋白质结构的定向改造              d． 凝乳酶基因的定向改造

 e． 将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞  f． 将定向改造的凝乳酶导入受体细胞

注：图中通过过程①、②形成重组质粒，限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接        ，理由是：                                  。

（2）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是              。可以利用转基因克隆猪技术解决的医学难题是，在器官移植中可以避免                 。

（3）上述图中转基因克隆猪运用了基因工程、                 、          等生物技术。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：          （用数字表示）。①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。

(1)该生产流程中应用到的现代生物技术有________________________、________________________。(写出其中两种)

(2)图中A、B分别表示________________________________________、________________________________。