10.
猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因可抑制肌细胞的增殖和分化。CRISPR/Cas9是一种最新出现的基因编辑技术,其主要过程是向导RNA(gRNA,含与目的基因部分序列配对的单链区)与Cas9核酸酶结合,引导Cas9核酸酶对DNA局部解旋并进行定点切割。科研人员利用该技术定向敲除猪胎儿成纤维细胞中MSTN基因,以期获得生长速度快、瘦肉率高的新品种。过程如下图,其中BsmBⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ表示相应限制酶的识别位点。分析回答:
(1)图中①过程用到的工具酶有________,图中gRNA基因序列设计的主要依据是_ _。
(2)科研人员可利用____ ____(方法)将重组质粒导入猪成纤维细胞,经_______ _过程合成Cas9核酸酶。
(3)过程③与DNA复制相比,特有的碱基配对方式有___________ ___。
(4)分析发现某基因敲除细胞株中MSTN基因的表达水平为正常细胞的50%,说明__________________。
(5)欲利用MSTN基因缺失成纤维细胞培育成MSTN基因缺失猪,请简要写出基本的流程。________________ ___。