图1

(1) 荷斯坦奶牛在初次产奶300天后就会停止分泌乳汁,进入干奶待产期。为缩短干奶期,可在奶牛哺乳期的合适时间为母牛进行____,以提高受孕率,促使母牛开始新一轮的产奶。 

(2) 过程①中产生的精子需进行____处理后方有受精的能力,过程④中移植的早期胚胎处于____期。图示过程中发生基因重组的是____(填序号)。 

图2

(4) 为保证和牛的品质,防止近亲繁殖,需要对和牛进行DNA检测。目前常用“拔牛毛”的方法获取带毛囊的牛毛进行检测,而不是用直接剪取牛毛进行检测,原因是____________。DNA检测首先需制备DNA荧光探针,过程如图2所示,在DNA酶Ⅰ作用下产生切口,随后在DNA聚合酶Ⅰ作用下,以荧光标记的______为原料,合成荧光标记的DNA探针。 

(5) 牛是反刍动物,消化道并不能分泌纤维素酶,但在其瘤胃中生活着大量的微生物,可以帮助牛消化纤维素,这些微生物与牛的关系是____。 

(1) 上述过程涉及的现代生物工程技术中属于分子水平的技术是____________。 

(2) 图中B过程常用______法将绿色荧光蛋白基因导入成纤维细胞中。 

(3) C过程要获得单个的成纤维细胞进行培养,需用_______处理猪胚胎的部分组织;E过程中若要获得大量的卵母细胞,需用____处理成年母猪;在进行H过程之前,需要对代孕母猪进行____处理。 

(4) H过程前,若要进行胚胎分割,用分割针或分割刀片将胚胎切开,吸出其中的半个胚胎,注入预先准备好的____中,或直接将____移植入受体。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将内细胞团均等分割,否则会影响分割后胚胎的_______。 

下图是克隆羊的培育流程图，根据所学知识回答下列问题：

(1)培育克隆羊时用到的卵母细胞可以从屠宰场收集，并在体外培养到____________________。

(2)从供体羊中取上皮细胞，用胰蛋白酶处理，然后进行分散培养。培养过程一般在________________中进行，整个过程必须保证细胞处于________________的环境中，所需营养物质要与体内基本相同。

(3)通过________法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还会将________一并吸出。

(4)去核的卵母细胞与供体细胞通过电击后融合，供体核进入受体卵母细胞，构建成重组胚胎。融合后的重组胚胎，需要用物理或化学的方法进行激活，使其完成________________过程。

(5)将重组胚胎发育到一定阶段，移植到同种的、________________相同的其他雌性动物体内，使之继续发育，最后形成克隆羊。移入的胚胎能够存活 ，是因为代孕子宫并不会对其发生________________，同时能够在子宫内建立正常的生理和组织联系。

材料甲：我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质（S蛋白，对应的基因为S基因）。
材料乙：T₄溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T₄溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97为的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T₄溶菌酶的耐热性。

材料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育。

材料丁：研究性学习小组参观某市市郊建立的以沼气为中心，以保护生态环境为目标的“猪-沼-鱼-肥-果蔬”生态模式时绘出了如下模式图，请分析回答：

回答下列问题：

（1）材料甲属于基因工程的范畴。其中用___________处理S基因和运载体，并用DNA连接酶使之结合，这里的DNA片段两两结合的产物有___________种。
（2）材料乙属于_______________工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对___________进行改造，或制造一种新的蛋白质的技术。在该实例中，引起T₄溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的_____________序列发生了改变。
（3）材料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到同种的、_________相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。胚胎移植之前，要对胚胎进行分割，应选择_____________期的进行分割。

（4）材料丁中，该生态系统最大的优点是_______________。该生态系统把很多单个生产系统通过优化组合有机地整合在一起，这体现了_____________原理。该生态系统的“基石”是______。沼气池中有产甲烷菌和不产甲烷菌等微生物，其生态学作用主要是_________________。

  (1)核移植的受体细胞一般选用____________________________________细胞。进行相关显微操作时，一般用微型吸管一并吸出细胞核和__________。

  (2)细胞在体外培养时，除培养液提供必需的营养条件、适宜的温度和pH、气体环境外，还需要有无菌、无毒环境，为保证无菌、无毒环境，在培养液中通常要加入__________。此外，还应定期__________。以便清除代谢废物。

  (3)现有一段人工合成的正常胰岛素基因的脱氧核苷酸序列，可利用PCR技术扩增正常胰岛素基因，该技术的原理是______________。将正常胰岛素基因导入胚胎干细胞通常采用________法。

  (4)“定向诱导”的本质是_____________________________________________________。

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。

(2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

(3)步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的_______设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有___________酶的酶切位点。

(4)为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

（1）图中的单倍体囊胚1最可能是由小鼠的________发育而来，所采用的技术应为________，培养过程中使用的培养液除含有一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、________等营养成分以及血清等物质。

（2）图中的单倍体ES应取自囊胚的________细胞，ES在形态上表现为________。

（3）由于物种间存在________，因此自然情况下哺乳动物远亲物种问的配子往往无法完成________作用，或者即便能完成也不能发育，但是人们为了生物学研究的便利，创造出了各类远亲物种间的杂合细胞，如小鼠一大鼠、人—鼠等杂交细胞，由于这些细胞都是由体细胞融合产生，因此杂交细胞中通常含有________个染色体组。

随着科学技术的发展,人们可以根据人类的需求来改造生物的性状,在许多领域取得了可喜的成果,图中是利用奶牛乳汁生产血清白蛋白的图解,据下图回答:

（1）在此工程过程中涉及的细胞水平的现代生物技术主要有________、_________。

（2）如果②的数量太少常用___________来扩增。在②进入③之前要构建基因表达载体，用到的工具酶有___________。

（3）能实现②进入③的常用方法是_____________。

（4）⑦是⑥生出的后代，而⑦的遗传性状和荷斯坦奶牛最相似,原因是______________________。要实现⑦批量生产血清白蛋白，则要求③的性染色体组成是_______。

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答下列有关问题：

（1）过程②利用的技术是_____________________，过程③中涉及到了基因工程技术，其中作为受体细胞的是____________________。

（2）过程③中获取的目的基因是__________________，可以根据该基因的___________________设计引物，利用PCR技术扩增目的基因片段。按此方法和图示技术流程，完成基Rag₂基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有_________________________________和耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)等。

毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关，获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

（1）过程①是基因工程的核心，通过过程①构建的基因表达载体除了含有KIFⅡ基因外，还必须有启动子、     以及     等。

（2）过程②必需加入     酶，才能获得单个的成纤维细胞。

（3）在过程③中，为了获得更多的卵（母）细胞，需用   处理成年母绒山羊。

（4）在过程④进行之前，需对卵（母）细胞进行                处理。过程④称为              。

（5）过程⑤称为            ，进行该过程的最佳时期是              ，通过      技术可以实现同卵多胎。 过程⑤能够成功进行的生理基础是__________。