[生物选修3：现代生物科技专题]

下图是转基因猕猴培育过程示意图，请据图回答：

（1）精细胞经变形后，高尔基体发育形成精子的顶体，顶体内含有的________可直接溶解卵丘细胞之间的物质，也能将透明带溶出一条孔道，协助精子穿过卵母细胞的放射冠和透明带，精子入卵。

（2）哺乳动物排出的卵子发育至________期时，才具备受精能力。

（3）过程①用到的工具酶中能识别特定核苷酸序列的是________。

（4）在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O₂以维持细胞呼吸外，还需要提供CO₂气体以维持________。

（5）图中过程⑦称为________，为使代孕雌猴与供体雌猴生殖器官的生理变化相同，此前需要对代孕雌猴做________处理。受体对移入子宫的外来胚胎不会发生________，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

（6）若要同时获得多只与此转基因猕猴相同的小猴，可对早期胚胎进行________，操作时选择发育到桑椹胚或囊胚期的胚胎进行。若选用囊胚期的胚胎，操作过程需要特别注意的问题是________。若要对早期胚胎进行长期保存，应将其置于________条件下。

杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图所示，据图回答下列问题：

(1)图中的卵母细胞应选择处于                  期的细胞；为了获得更多的卵母细胞，需用                激素对雌性杜泊羊进行超数排卵处理，该方法获得的卵母细胞                   (填“能”或“否”)直接进行体外受精。

(2)用于移植的早期胚胎通常处于                 阶段。为了充分发挥单个胚胎的繁殖潜力，可通过                 技术获得同卵双胎。此双胎羊的性别                   (填“相同”或“不相同”或“不一定相同”)。

(3)杜泊羊的ES细胞可由囊胚的                      分离培养获得。该细胞的结构特点是                         。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

   杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点,被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图所示,

（1）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其      。采集的精子需要经过      ，才具备受精能力。判断卵细胞是否受精的重要标志是      。

（2）在体外培养受精卵时，培养液中通常需加入         等一些天然成分，还需要提供CO₂以维持            。

（3）在胚胎移植前要对接受胚胎的当地普通绵羊进行          处理。代孕母羊对置入子宫的早期胚胎基本上不发生        ，这就为早期胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

（4）采用胚胎分割技术能得到“同卵多胞胎”，对胚胎进行分割时，要特别注意将        均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。

(选修三)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIFⅡ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

(1)过程①中最常用的运载工具是　　　　,所需要的酶是限制酶和　　　　。

(2)在过程②中,用　　　　处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中,将成纤维细胞置于5% CO₂的气体环境中,CO₂的作用是　　　　　。

(3)在过程③中,用　　　　处理以获取更多的卵(母)细胞。成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行　　　　处理。

(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是　　　　。在胚胎移植前,通过　　　　技术可获得较多胚胎。

（选修一）从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从　　　　　　　环境采集。

（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择　　　　　的培养基，并在　　　　　　　条件下培养。

（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。 

获得图A效果的接种方法是　　　　　　　　，获得图B效果的接种方法是　　　　　　　　。

（4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行　　　　　，接种前要进行　　　　　，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在　　　　　　　条件下进行。

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

（1）在培育转人生长激素基因牛过程中，②过程常用的方法是               ，  采用                  技术可以获得多头基因型相同的转基因牛。

（2） 转人生长激素基因牛可通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，在构建基因表达载体时，人生长激素基因的首端必须含有        。

A.人生长激素基因的启动子     B.牛生长激素基因的启动子

C.人乳腺蛋白基因的启动子     D.牛乳腺蛋白基因的启动子

启动子的作用是能够被____________________识别和结合，从而启动转录过程

（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅲ代表的细胞具有                                                       的特点。

（4）在抗虫油菜培育过程中，应将抗虫基因基因转移到Ti质粒的              上；④过程最常采用的方法是                         ；⑤过程采用的技术是                    ；在分子水平上可采用                    方法来检测转基因抗虫油菜的抗虫基因是否成功表达。

（5）下面是获取目的基因的几种方法，其中需要模板的是_______。

① 从基因组文库中获取目的基因   ② 利用PCR技术扩增目的基因  

③ 构建cDNA文库               ④ 通过DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因     

A．①②    B．②③    C．①③     D．①④

（1）在获取卵母细胞之前需用促性腺激素对奶牛进行处理，目的是           。

（2）“转基因牛”D培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是受精卵的          高。

（3）图中数字标号①代表的结构为           ，①将来发育为             ，c→d过程需对其       分割。

（4）在培育良种牛的过程中，都运用了动物细胞培养技术．在动物细胞培养过程中，为防止杂菌的污染而要加入一定量的            。

I．采集良种供体奶牛的卵母细胞和精液，通过体外受精，形成受精卵；

II．将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵，形成重组细胞；

III．电脉冲刺激重组细胞促使其形成早期胚胎；

IV．将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

请回答下列问题：

（1）一般情况下，良种奶牛所排出的卵子往往数量不足，通 过_____________ 处理可以使其排出更多的卵子。

（2）步骤I中，体外受精前，需要对精子进行_________处理。受精过程中防止多精入卵的生理反应包括____________反应和卵细胞膜反应。

（3）步骤II中，将目的基因导入受精卵最为有效的方法是__________ 。导入前，需要将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这一步骤属于基因工程操作“四步曲”中的什么步骤？__________________________

（4）实验步骤III中，进行早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐、有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和_______________。

（5）若需迅速得到大量转基因奶牛，可采用下列处理方法：在步骤IV中将早期胚胎分割成若干个胚胎。进行上述操作时，应选择发育至__________阶段或桑椹胚阶段的胚胎进行操作，如果选择前者，分割时必须注意要将早期胚胎中的_______均等分割。

（6）将胚胎移入受体牛体内属于__________ 技术，在畜牧生产中采用这种技术的优势主要是_________________________。

(1)获得的8细胞胚胎属于胚胎早期发育的______________期。

(2)用“某种酶”处理获得的胚胎，该酶是________________；“同一溶液”从细胞培养的角度分析，除含有必需的已知营养物质外，还必须添加______________________。

(3)将24细胞胚胎移入一只老鼠子宫内的技术是________，该技术的优势是______________。

(4)若要获得多个组装鼠，可将组装胚培养至_____期进行切割，切割时需注意_____________。

回答有关基因工程和胚胎工程的问题：

I .抗冻蛋白是一类抑制冰晶生长的蛋白质，能降低水溶液的冰点，从而导致水溶液的熔点和冰点出现差值，这个温度差称为热滞值。昆虫抗冻蛋白的热滞值最高，为3～ 6℃，鱼的热滞值为0.7～1.5℃。因此，昆虫抗冻蛋白在实际应用上具有更大的潜力。为了扩展一些植物的生存范围，科学家利用昆虫抗冻蛋白（AFPS）的异源表达，现已成功地提高了烟草的抗冻能力。请分析回答相关问题：

（1）基因工程的核心步骤是__________________，这一过程需要的工具酶是____________________。将AFPS基因导入烟草细胞中，常用____________法，这是因为烟草属于双子叶植物，此操作过程中使用的运载体是___________。

（2）若检测是否产生抗冻蛋白，一般采用_________方法进行分子水平的检测。

II .胚胎工程是一项综合性的动物繁育技术，可在畜牧业和制药业等领域发挥重要作用。下图是通过胚胎工程培育试管牛的过程。

（1）有时需要将早期胚胎分割，提高胚胎的利用率。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意                 ，以免影响胚胎的恢复和进一步发育。

在对囊胚阶段的胚胎做DNA分析性别鉴定时，所取的样本是          细胞。

（2）试管牛能在受体子宫中存活的生理基础是                      。

（3）胚胎干细胞培养也是一项重要的胚胎工程技术。胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的，在功能上具有           ，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞。在体外培养条件下，为保持胚胎干细胞的未分化状态，通常在培养皿中铺上一层          细胞或培养在添加了抑制因子的培养液中。