图1

(1) 荷斯坦奶牛在初次产奶300天后就会停止分泌乳汁,进入干奶待产期。为缩短干奶期,可在奶牛哺乳期的合适时间为母牛进行____,以提高受孕率,促使母牛开始新一轮的产奶。 

(2) 过程①中产生的精子需进行____处理后方有受精的能力,过程④中移植的早期胚胎处于____期。图示过程中发生基因重组的是____(填序号)。 

图2

(4) 为保证和牛的品质,防止近亲繁殖,需要对和牛进行DNA检测。目前常用“拔牛毛”的方法获取带毛囊的牛毛进行检测,而不是用直接剪取牛毛进行检测,原因是____________。DNA检测首先需制备DNA荧光探针,过程如图2所示,在DNA酶Ⅰ作用下产生切口,随后在DNA聚合酶Ⅰ作用下,以荧光标记的______为原料,合成荧光标记的DNA探针。 

(5) 牛是反刍动物,消化道并不能分泌纤维素酶,但在其瘤胃中生活着大量的微生物,可以帮助牛消化纤维素,这些微生物与牛的关系是____。 

  (1)在培育转入甲型H1N1病毒抗体基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是_____________，②过程常用的方法是_____________。

  (2)转入甲型H1N1病毒抗体基因的牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N1病毒抗体，在基因表达中，甲型H1N1病毒抗体基因的首端必须含有________，它是________识别和结合的位点。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________技术，培养出多头相同的转基因牛。

  (3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是________细胞，Ⅱ代表的细胞具有________________________________________的特点。

  (4)制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术。与动物细胞融合过程不同，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用________________对细胞进行处理。

(1) 上述过程涉及的现代生物工程技术中属于分子水平的技术是____________。 

(2) 图中B过程常用______法将绿色荧光蛋白基因导入成纤维细胞中。 

(3) C过程要获得单个的成纤维细胞进行培养,需用_______处理猪胚胎的部分组织;E过程中若要获得大量的卵母细胞,需用____处理成年母猪;在进行H过程之前,需要对代孕母猪进行____处理。 

(4) H过程前,若要进行胚胎分割,用分割针或分割刀片将胚胎切开,吸出其中的半个胚胎,注入预先准备好的____中,或直接将____移植入受体。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将内细胞团均等分割,否则会影响分割后胚胎的_______。 

（1）②为PCR过程，除了要加入引物、原料外还需要加入________________________，在此过程中引物的作用是_____________________________________。

（2）BamHⅠ的识别序列为—G↓GATTC—，HindⅢ的识别序列为—A↓AGCTT—，选用这两种酶进行操作的意义是______________________________，除此之外，③过程还需要_____________酶。

（3）BLG基因5′端调控序列能使hLF基因在羊的乳腺细胞中特异性表达，这是因为__________________________________________________________________。

（4）要获得能表达目的基因的羊，应将重组质粒导入羊的_____________（填“乳腺细胞”“去核卵细胞”或“受精卵”），获得优良胚胎后，为了提高胚胎的利用率，常采用____________的方法来处理胚胎。

(1) 要实现①超数排卵,应在崂山奶山羊A发情周期的某一阶段用______处理,然后在恰当时期采集卵子。通过②采集的精子不能直接使成熟的卵子受精,要对精子进行____处理,对羊的精子常用化学诱导法,即用一定浓度肝素或钙离子载体A23187溶液对精子进行诱导。 

(2) 若要大量获得目的基因,可使用____扩增白蛋白基因。要使人的白蛋白基因在奶山羊乳腺细胞中特异性表达,完整的基因表达载体要包括__________、____、目的基因、标记基因等部分。 

(3) 过程④需将重组质粒用____方法注入受精卵的雄原核内,在显微镜下判断是否受精的标志是____________。 

(4) 对移植前的胚胎进行性别鉴定时,宜取囊胚期的______细胞进行鉴定,一般釆用SRY-PCR方法,选择出现阴性反应的____(性别)胚胎进行移植。 

(5) 在胚胎移植前,通过____技术可获得较多胚胎。移植后的胚胎能在受体子宫中存活,其生理基础是________________。进行胚胎移植的优势是可以充分发挥________________。

图2

(1) 图1中构建的重组表达载体,目的基因的上游应有____,它是____酶识别和结合的部位,驱动基因的转录。 

(2) 在图1过程③中,用____激素处理以获取更多的卵(母)细胞,这些卵(母)细胞需在体外培养到_______期,方可进行过程④的操作。 

(3) 图1中过程④采用的生物技术是______,得到的重组细胞发育为早期胚胎后,可通过____技术获得较多胚胎。 

图3

                              图1                                                                            图2

（1）图1中a、c过程分别是指______________、_______________；b是冲卵过程，是指从供体母牛子宫中冲出_____________进行质量检查、培养。

（2）常采取胚胎分割移植的方法提高牛胚胎的利用率，分割处理的时期是______（用图2中字母回答）；理由是_____________________________。

（3）图2中的2是___________，若要对移植的胚胎做性别鉴定，通常取B图中［  ］________细胞进行鉴定，原因是_____________________。

(2)纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较________，而且菌种易________．常用的凝固剂是________．

(3)从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是________，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是________．

（二）人组织纤溶酶原擞活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

(1)卵母细胞可以从活体________中采集，还可从已处死的雌羊卵巢中获取．对供体母羊用________处理，可以获取更多的卵(母)细胞．采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力．

(2)欲用有限的早期胚胎获得多个转基用个体，可以利用________技术．由于代孕母羊对移入其子宫的外来胚胎________，才使早期胚胎能在代孕母羊体内存活．

(3)质粒上应有________，才能使htPA基因插入其中．在转htPA基因母羊的肌肉细胞中________(能、不能)检测到目的基因．若在其羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达．

如图表示转基因牛的培育过程，请据图分析回答下列问题：

​

（1）①过程为________；

（2）体外培养胚胎干细胞时．通常要加入________等一些天然成分，除了要保证被培养细胞处于无菌、无毒及氧气充足的环境中，还需要保证细胞生活所需适宜的________和________；

（3）②过程是将细胞注入图中囊胚的________位置，母牛A和B需要用激素进行处理使其________；

（4）为获得较多基因型相同的犊牛，常采用________的方法。③过程是________，实际上是________的过程。

下图为胚胎移植过程示意图，请回答以下问题。

（1）胚胎移植技术中对甲的要求是                                  。

（2）过程①是___________________________。

（3）过程③常用促性腺激素处理，以达到                       的目的。

（4）从丙获得的精子需要经过                 处理后，才具有受精能力。

（5）精子和卵细胞在共同培养过程中，一般只有一个精子能够进入卵细胞，

这依赖于                           和卵细胞膜反应这两道屏障。

（6）欲得到更多的后代牛丁，可将收集得到的胚胎进行分割，对囊胚进行分割时要求将内细胞团均等分割，否则会影响