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亚麻酸(ALA)能够促进卵母细胞体外成熟和囊胚发育。为了给水牛体外胚胎产业化生产中合理使用亚麻酸提供理论依据,科研人员研究了不同浓度的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟、早期胚胎发育的影响,分析回答:
①卵母细胞的收集和体外培养:从屠宰场水牛的卵巢中收集并处理卵母细胞,随机分成5组,分别置于不同浓度亚麻酸的培养液中,在39 ℃、5%CO2的培养箱中培养2224 h。
②卵母细胞成熟判断:在显微镜下观察卵母细胞,判断其是否成熟,统计结果如表1。
③体外受精:在受精溶液中进行体外受精后,用显微镜观察判断是否完成受精。
④早期胚胎培养:将受精卵移入胚胎培养液中培养4448 h后检查分裂情况,每隔48 h更换一次培养液,第59 d观察囊胚发育情况,统计结果如表2。
表1 亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟的影响
ALA浓度 /(μmol·L-1) | 卵母细胞数 | 核成熟卵子数 |
0 | 229 | 137 |
10 | 201 | 133 |
50 | 227 | 166 |
100 | 215 | 137 |
200 | 215 | 135 |
表2 亚麻酸对水牛早期胚胎发育的影响
ALA浓度 /(μmol·L-1) | 培养卵数 | 分裂数 | 囊胚数 |
0 | 309 | 171 | 75 |
10 | 325 | 182 | 82 |
50 | 292 | 185 | 97 |
100 | 310 | 188 | 84 |
200 | 231 | 145 | 68 |
(1) 步骤①中,细胞培养箱中加5%CO2的作用是___________。
(2) 步骤②中,成熟卵母细胞内染色体的行为特征是____________。步骤③中,判断是否受精的依据是_____________________。
(3) 步骤④中,受精卵经过__________(时期)发育成囊胚,培养过程定期更换培养液的目的是______________。
(4) 根据实验数据分析,亚麻酸溶液为200 μmol·L-1时,对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育起________作用。
(5) 本实验结果表明,____的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育都较有利,其判断依据是 _________。