2016年10月19日美国新希望生殖医学中心正式宣布，世界首个核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。为中东一位线粒体携带有亚急性坏死脑病基因的母亲带来了希望。培养过程如下图，据图回答：

（1）获得重组卵母细胞A也会用到体细胞核移植技术，完成①过程需要用微型吸管吸出______，完成④过程的B细胞需要选择_________（时期）的卵母细胞。

（2）卵母细胞的获取过程中，需要对女性进行超数排卵处理，超数排卵的方法是给女性注射_______激素，超数排卵技术带来的危害之一是_________。

（3）细胞A的培养过程③所需气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是________________。

（4）为了提高已有胚胎的利用率，可采用________________技术。若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意的问题是____________。

（5）设计试管婴儿技术与解决不孕问题而进行的试管婴儿技术的主要区别是前者需要在植入前对胚胎进行___________________。

控制哺乳动物的性别对于畜牧生产有着十分重要的意义。根据牛的X精子的DNA含量比Y精子的高出4%左右，利用这一差异人们可以借助特殊仪器分离精子，从而有效控制性别，再通过胚胎工程技术就可培育出所需性别的试管牛（如下图所示）。请根据以上信息回答下列问题：

（1）图中的过程①是指      ，要将分离得到的精子经过      处理，同时卵母细胞应培养至      　　　期，方可完成该过程。

（2）在①过程中首先发生      反应，精子穿越放射冠和透明带，透明带反应和      是防止多精入卵的两道屏障。

（3）在体外将受精卵培养至     期时可用于移植，培养过程中除需给予一定量的O₂以维持细胞呼吸外，还需要提供CO₂气体以维持      。

（4）受体母畜对移入子宫的外来胚胎基本上不发生      反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。

下图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程；图2表示培育优质奶牛的过程。请据图回答下列问题：

(1) 图1所示过程所用的生物技术有         。

(2) 将经免疫处理后的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能分泌抗X的单克隆抗体的杂交瘤细胞的过程中至少要进行两次筛选：一次是通过           培养基，筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过            检测，筛选出能分泌抗X的单克隆抗体的杂交瘤细胞。

(3) 通过上述方法得到的单克隆抗体可快速准确地识别抗原X，其原因是该抗体具有                   的特点。

(4) 图2中的重组细胞         (填“①”或“②”)实现了基因的重组。

(5) 图2中的早期胚胎发育到         阶段才可以移植，在移植之前，需要进行质量检查，用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时，发现活胚胎细胞不能被染色，其原因是                。

(6) 为了获得多个基因型相同的优质奶牛，可采用的技术手段是         。

回答下列（一）、（二）小题：

（一）天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下图。

（1）在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，这是因为酶         。

（2）在酒精发酵阶段，发酵罐先通气，后密闭。通气能提高        的数量，有利于密闭时获得更多的酒精产物。若在酒精发酵环节中温度过低，带来的弊端是           。

（3）在醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层固体发酵法，发酵30天。工艺如图2：

①发酵过程中，定期取样测定醋酸杆菌密度变化，趋势如图3。据图2、3分析，与颠倒前相比，B层醋酸杆菌在颠倒后密度变化的特点是         ，由此推测，影响醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是        （至少答出两项）。

②乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。发酵过程中，发酵缸中         （答出什么时期的什么层）的醋醅有利于乳酸菌繁殖，积累乳酸。

③成熟醋醅中乳酸菌的种类、数量均明显减少，主要原因可能是        。

（二）如图为纯种荷斯坦小奶牛的繁殖过程，请据图回答下列问题。

（1）克隆动物培育过程与图示繁殖过程相比，特有的技术手段是       ，动物的这两种繁殖类型，实质性的区别在于后者仍是        。

（2）对供体母牛做超数排卵处理时，一般可采用         激素。

（3）如果要培育能产生某种药用蛋白的转基因荷斯坦奶牛，可采用具体的          技术将目的基因导入到受精卵中，并采用“         ”杂交的方法检测受体细胞中的目的基因是否表达。

（4）在转基因技术中，常需要对相关DNA的碱基序列进行测序。下图中甲、乙为DNA测序仪显示的图像，已知甲图显示的碱基顺序为TCGAAT，则乙图显示的碱基顺序为（   ）

A.TCGCAC        B.ACCGTG        C.ATTCAG        D.TCCGGA

如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点．据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________________（限制酶）同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含__________的培养基上进行。
（2）过程②代表的生物技术是__________，此技术对供体母牛、代孕牛进行选择后，并用激素进行的处理是_____________。如对囊胚阶段的胚胎进行切割，应注意____________________，以免影响胚胎的恢复和进一步发育。
（3）若转基因牛的乳汁中不含人乳铁蛋白，根据中心法则分析，其可能的原因是_______________________________。

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题。

(1)要使人的生长激素基因在牛的垂体细胞中特异性表达,完整的基因表达载体要包括目的基因、_________、__________________、标记基因等部分.在③之前要检测早期胚胎细胞是否已经导入人生长激素基因,宜采用_________________技术.③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段,可以采用______           _____技术,培育出多头相同的转基因牛犊。

(2)prG能激发细胞不断分裂,通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体,Ⅰ最可能是___________细胞,Ⅱ代表的细胞具有____              ________的特点.

(3)在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，则与采用叶肉细胞相比较，其优点是_______________________________，⑤过程采用的技术是___________________________。科学家预言，此种“转基因抗虫棉”独立种植若干代以后，将出现不抗虫的植株，此现象来源于_______________。

科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞(iPS)，继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠。流程如下：

(1)从黑鼠体内获得体组织用_________处理后将细胞分散，对其进行的初次培养称为________，培养的细胞在贴壁生长至铺满培养皿底时停止分裂，这种现象称为________。贴壁的细胞再次分瓶培养称为_________。

(2)图中2­细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得，该过程称为________；也可从灰鼠体内取出卵子，通过________后进行早期胚胎培养获得。

(3)图中重组囊胚通过________技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用________方法保存。

(4)小鼠胚胎干细胞(ES)可由囊胚的________分离培养获得。iPS与ES细胞同样具有发育全能性，有望在对人类iPS细胞进行定向_____________后用于疾病的细胞治疗。

人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如下图所示。

(1)卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死的雌鼠__________中获取。

(2)图中的高血压相关基因作为___  __,质粒作为________,二者需用__________切割后用DNA连接酶连接成重组载体,该过程与质粒上含有__________有关.

(3)子代大鼠如果________________________________和______________，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。

(4)在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是________、早期胚胎培养和胚胎移植。

回答下题：

(一） 酿酒、造醋是我国的传统技艺，为了探究与改进制造工艺，进行了相关研究。请回答有关问题：

（1）目的菌株筛选后应该利用     培养基进行扩大培养，       是消除污染杂菌的通用方法。

 (2)制作葡萄酒过程中，为了酵母菌迅速发生作用，可加少量      混匀。将葡萄浆放入发酵瓶，装量不超过      （A.1/2 B.2/3 C.3/4 D.100%）,当发酵瓶       表示发酵完毕。

 (3)醋的制作中发酵瓶中装锯末至       ，将适量的醋化醋杆菌培养物加在酒-水混合物中，混匀，并调PH至       后，倒入发酵瓶。

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIF Ⅱ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIF Ⅱ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。请回答相关问题：

(1)过程①中构建重组表达载体所需要的酶是限制性核酸内切酶和      。（A.DNA聚合酶B.DNA连接酶C.逆转录酶D.解旋酶）

(2)在过程②中，用       处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞，置于    中培养。

(3)在过程③中，一般用     激素处理供体母牛，使其超数排卵；对供体母牛和代孕母牛进行           处理。

 (4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是          。在胚胎移植前，通过                技术可获得较多胚胎。