请回答下列与哺乳动物精子和卵子发生有关的问题：

（1）某动物排卵时，减数第一次分裂尚未完成，此时卵子处于___________卵母细胞阶段，当该细胞发育至 ______________________________期时，才具备受精能力．当_____________________________                                  ，说明受精作用已经完成。

（2）动物的早期胚胎移植到同种且 _______________与供体相同的动物体内，使之继续发育为新个体的技术叫做胚胎移植。为了获得更多的早期胚胎，常用_______________激素对供体进行处理，其目的是获得更多的卵母细胞 ，经人工受精后可得到早期胚胎。

(3) 用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时，发现活胚胎细胞不能被染色，其原因是活细胞膜___________________________________________　。

（4）若要通过胚胎移植获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对发育到桑椹期或囊胚期阶段的早期胚胎进行____________　处理，再植入到受体内，若要对早期胚胎进行长期保存，应将其置于   冷冻条件下。

近期，中国和韩国的科学家利用某项技术去掉了猪体内的肌肉生长抑制基因，然后把这些“改造过的基因”植入猪的受精卵中，进而发育成肌肉细胞生长不受限制的“肌肉猪”。回答下列问题：

（1）利用体外受精的方法获得猪的受精卵时，采集卵母细胞时，可用__________激素处理母猪，使其排出更多的卵子，然后从________中冲取卵子，与获能的精子在体外受精。

（2）“改造过的基因”需与________等拼接成基因表达载体再导入受精卵中。

（3）将具有“改造过的基因”的受精卵细胞培育成“肌肉猪”需利用_________________等胚胎工程技术。胚胎工程技术最后一道工序在生产实践中的最大意义是__________。

欲利用基因工程技术将人胰岛素基因转入到小鼠基因组中，以期利用小鼠生产出人胰岛素，请回答：

(1)若用逆转录的方法获得人胰岛素基因，则需要从人体相应的______________细胞中提取mRNA，获得的人胰岛素基因经过相应处理后，再利用显微注射技术将其注入到受体细胞中，下列最不适合作为受体细胞的是_______（A. 受精卵  B. 胚胎干细胞  C. 第一次卵裂形成的细胞  D. 第三次卵裂形成的细胞）

(2)为获得更多的受体细胞，可先对成年雌鼠注射激素进行________处理，将获得的卵母细胞培养成熟，与经__________处理的精子结合形成受精卵后再进行后期操作。

(3)导入胰岛素基因的受体细胞还需借助____________________、__________________等技术才能成为转基因小鼠。

I.下图为哺乳动物胚胎分割和性别鉴定示意图。请据图回答：

(1)胚胎分割时，一般采用发育良好、形态正常的_____________。对胚胎进行分割时，要特别注意将________均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。

(2)通常胚胎干细胞可以从_____________________________________(写出两种方法)中分离得到。

Ⅱ.请回答胚胎工程方面的问题：

（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、___________、__________以及在母体中发育和产出等过程。

（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其_________。另外，培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和______________。

（3）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是____________________。

哺乳动物排卵后卵巢内残留的某些细胞团称黄体，其在卵巢内存在的时间长短取决于雌性哺乳动物是否妊娠。如果没有妊娠，黄体发育两周后即退化，反之可以维持数月。回答下列问题：

（1）哺乳动物精子的发生过程和卵子发生过程的主要区别有：精子的形成需经过变形 且生殖细胞数量多；卵子的发生不需变形且生殖细胞数量少。除此之外还有________________________

_____________（答出一个区别即可）。

（2）在受精前，精子需发生相应的生理变化后才具备受精能力，该过程称为_____________。在受精阶段，精子与卵子相遇时，首先发生_____________，释放出来的酶溶解放射冠和透明带。当精子触及卵细胞膜的瞬间，会产生阻止多个精子入卵受精的反应称为_____________。

（3）进行胚胎分割时，需对囊胚阶段的内细胞团进行均等分割，其原因是______________________________________________。

（4）胚胎植入子宫后能产生大量的蛋白质类激素X，而未受孕的母体内激素X的含量极低。请推测激素X对黄体的生理作用是______________________________________。

（1）人体组织内的A物质是一种重要的药用蛋白质，可以通过基因工程从母羊的乳汁中获得。获取A基因和载体用________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。将其导入母羊受精卵常用的方法是________。检测目的基因是否插入到受体细胞DNA上，可采取___技术。

（2）在胚胎工程的应用中，为获取更多的卵（母）细胞，要对供体动物注射______，使其超数排卵。从良种的雄性个体采集的精子需要_____后才能进行受精作用。体外受精可以在____或者专用受精溶液中完成受精。

（3）一般当早期胚胎发育到______阶段时，将胚胎移入受体（代孕）个体子宫内断续发育。移植后的胚胎在受体子宫内存活，其生理基础是_______。

（4）蛋白质工程是以蛋白质分子的空间结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过____，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活需要。

（5）我国西北土地沙化和盐渍化非常严重，原因有多种，其中一个主要原因是超载放牧导致草地退化。试分析上述事实主要违背了生态工程的_________原理。

猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因可抑制肌细胞的增殖和分化。CRISPR/Cas9是一种最新出现的基因编辑技术，其主要过程是向导RNA(gRNA，含与目的基因部分序列配对的单链区)与Cas9核酸酶结合，引导Cas9核酸酶对DNA局部解旋并进行定点切割。科研人员利用该技术定向敲除猪胎儿成纤维细胞中MSTN基因，以期获得生长速度快、瘦肉率高的新品种。过程如下图，其中BsmBⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ表示相应限制酶的识别位点。分析回答：

(1)图中①过程用到的工具酶有________，图中gRNA基因序列设计的主要依据是_  _。

(2)科研人员可利用____                ____(方法)将重组质粒导入猪成纤维细胞，经_______           _过程合成Cas9核酸酶。

(3)过程③与DNA复制相比，特有的碱基配对方式有___________      ___。

(4)分析发现某基因敲除细胞株中MSTN基因的表达水平为正常细胞的50%，说明__________________。

(5)欲利用MSTN基因缺失成纤维细胞培育成MSTN基因缺失猪，请简要写出基本的流程。________________                                               ___。