6.
Rag
2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag
2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前如何对卵母细胞进行改造?______。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到______期时,可从其______细胞中分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有基因Rag
2的表达载体。利用PCR技术扩增Rag
2基因片段时,可以根据已知的Rag
2基因的______设计引物,且利用______原理,通过控制______来控制双链的解聚与结合。
(4)用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag
2基因片段,为将该片段直接连接到载体上,所选择的载体应具有______酶的酶切位点。
(5)为检测Rag
2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的______,用相应抗体进行杂交实验。