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            • 1.

              ES细胞(胚胎干细胞)在基础生物学、畜牧学和医学上有十分重要的应用价值。请回答下列问题:

              (1)ES细胞在体外培养时,可以增殖而不发生分化。在ES细胞培养液中加入分化诱导因子___________(只填一种即可)时,就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化。

              (2)将人的ES细胞进行细胞培养时,要用__________酶分散细胞,制成细胞悬液,放入培养瓶中进行培养。使用合成培养基进行细胞培养时,通常需要加入_____________等天然成分。在细胞培养过程中,ES细胞主要通过_______________的方式进行细胞增殖。

              (3)将来源于两种不同哺乳动物的两个ES细胞进行细胞融合,常用的生物诱导因素是____________,经融合后所形成的细胞被称为__________。动物细胞融合技术的意义在于__________________。

            • 2.

              (1)ES细胞能分化出成体动物的所有组织和器官,这体现了ES细胞的_____________。为获得适合人体移植的猪器官,减弱或消除排斥反应,可对ES细胞进行___________。

              (2)—个ES细胞变成ES细胞群的过程中,细胞_________(填“可能”、“不可能”)出现接触抑制现象。下列关于动物细胞培养和核移植的叙述,正确的是__________。

              A.从原代培养物或细胞系中选择和纯化无法获得细胞株

              B.动物细胞培养基中添加胰岛素的目的是调节血糖浓度

              C.胚胎干细胞培养时,加滋养层是为了抑制胚胎干细胞分化

              D.核移植形成的重组细胞在初次分裂时核基因不转录

              (3)为获得含兔褐毛基因的转基因小鼠,可将褐毛基因通过_________法导入ES细胞核中,再将该核移植到去核的卵细胞中,经过_____________、胚胎培养、胚胎移植,最终由代孕母鼠产下克隆小鼠。

              (4)为获得大量的上述克隆小鼠,可用转基因的小鼠胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为含有褐毛基因的胚胎成纤维细胞可进行__________培养,理论上可获得无限个转基因小鼠。

            • 3.

              据《自然》杂志介绍,日本研究人员利用实验鼠的胚胎干细胞人工培育出了名为“视杯”的视网膜雏形结构。据悉,在一种特殊的培养介质中,来自实验鼠的胚胎干细胞能逐渐发育成感光细胞、神经细胞等,进而形成视网膜的雏形结构。研究人员现正在测试该“视杯”是否真能感受光线刺激,并将相关神经信号传递给实验鼠的大脑。

              (1)实验鼠的胚胎干细胞________(填“具有”或“不具有”)细胞周期,可取白________。

              (2)利用实验鼠的胚胎干细胞能培育出视网膜雏形,其根本原理是________。该过程是否实现了细胞的全能性?________。在体外诱导培养时,“特殊的培养介质”中除了加入________等天然成分,很可能还应添加有________,以诱导胚胎干细胞向视网膜雏形分化。

              (3)用ATP合成酶基因作为探针,如果能与胚胎干细胞诱导培养过程中某细胞内的mRNA杂交,能否说明该细胞已发生分化?________,理由是________。

              (4)假如研究人员在对“视杯”细胞中的某种酶进行提取时,向“视杯”细胞悬液中加入一定量的pH=7.0的缓冲液并充分搅拌,获得了破碎的“视杯”细胞。与生理盐水相比,使用缓冲液的优点:________。

            • 4.

              科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞(iPS),继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠,流程如下:

              (1)从黑鼠体内获得体细胞后,对其进行的初次培养称为_________;培养的细胞在贴壁生长至充满培养皿底时停止分裂,这种现象称为_______。

              (2)图中2—细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得,该过程称为__________;也可从灰鼠体内取出卵子,通过_____________后进行早期胚胎培养获得。

              (3)图中重组囊胚通过____________技术移入白鼠子宫内继续发育,暂不移入的胚胎可使用_________方法保存。

              (4)小鼠胚胎干细胞(ES)可由囊胚的______________分离培养获得,iPS与ES细胞同样具有发育的_______性,有望在对人类iPS细胞进行定向诱导分化后用于疾病的细胞治疗。

            • 5. 科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如下图1:

              (1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的______.
              (2)将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为______.
              (3)步骤③中,需要构建含有干扰素基因的______.构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时,可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取______作为引物.对干扰素基因片段和质粒进行酶切时,可选用限制酶的组合为______.
              (4)将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察,选择发______色荧光的细胞进行体外诱导.为检测干扰素基因是否表达,可以采用______的方法.
            • 6.

              克隆羊的成功轰动世界,它不仅奠定了疾病克隆性治疗的基础又解决了器官移植中供体不足的问题,同时也给人类带来了一些过去尚未遇到的问题.下图为人类对克隆羊技术的拓展图和应用。请据图回答问题。

              (1)图中所涉及的现代生物技术有__________________________________                 等。

              (2)下列有关胚胎移植的叙述正确的有(多选)(    )

               A.冲卵指的是从子宫中冲出胚胎,而非冲出卵子

               B.只有供、受体生理环境高度一致,移入受体的胚胎才能被接受,并继续发育

               C.供体和受体要进行免疫检查,防止发生免疫排斥反应

               D.不同动物其胚胎移植的时间不同,人的胚胎移植最好在四细胞阶段进行

              (3)图中两个婴儿长大后,外貌、性格和其他特征与原型男人相同,这说明__________具有全能性。

              (4)使用培养基进行胚胎干细胞培养时,通常要加入___________________等天然成分,除了保证被培养细胞处于无菌、无毒及充足氧气的环境中,还需要保证细胞生活所需的____________等 ;早期胚胎发育在___________阶段以前的细胞是全能细胞。

              (5)图中从“内细胞团到胚胎干细胞”的培养过程中,必须用_____________处理内细胞团,使之分散成单个细胞。干细胞形成组织、器官时必须要进行细胞的分裂和分化。

              (6)在体外培养胚胎干细胞能否获得动物器官?为什么?________________________。

            • 7. (2016春•唐山校级期中)如图为哺乳动物的胚胎干细胞及其分化的示意图.请回答:
              (1)胚胎干细胞是从动物胚胎发育至    期的内细胞团或胎儿的    中分离得到的一类细胞.
              (2)图中分化程度最低的干细胞是    .在体外培养条件下,培养液中加入    因子,可诱导该种干细胞向不同类型的组织细胞分化.
              (3)在机体内,皮肤干细胞分化成皮肤细胞是机体细胞中基因    的结果.
              (4)某患者不能产生正常的白细胞,通过骨髓移植可以达到治疗的目的,骨髓的治疗的实质是将上图的    细胞移植到患者体内.
              (5)若要克隆某种哺乳动物,从理论上分析,上述红细胞、白细胞神经细胞中不能选用作为供体的细胞是成熟的    ,其原因是    
              (6)若某药物可抑制肝肿瘤细胞NDA的复制,使用该药物可使肝肿瘤细胞停留在细胞周期的    期.
              (7)在制备单克隆抗体过程中的细胞融合阶段,用    细胞与骨髓细胞融合,经多交筛选最终得到能分泌    的杂交瘤细胞.
            • 8. Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:

              (1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 ______ (结构).
              (2)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体.可以根据Rag2基因的 ______ 设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段.用Hind III和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 ______ 酶的酶切位点.
              (3)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ______ ,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验.
            • 9.
              Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:

              (1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 ______ (结构).
              (2)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体.可以根据Rag2基因的 ______ 设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段.用Hind III和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 ______ 酶的酶切位点.
              (3)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ______ ,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验.
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