下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病（基因缺陷导致胰岛B 细胞不能正常合成胰岛素）的过程设计图解，请据图回答：

（1）图中①、③所示的结构分别是______________ 、 内细胞团（或胚胎干细胞） 。

（2）图中②所示的生物工程技术分别是_____________。

（3）过程④的完成需要用到的基因操作工具有 __________________________。

（4）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是_______________________。

图1

(1) 荷斯坦奶牛在初次产奶300天后就会停止分泌乳汁,进入干奶待产期。为缩短干奶期,可在奶牛哺乳期的合适时间为母牛进行____,以提高受孕率,促使母牛开始新一轮的产奶。 

(2) 过程①中产生的精子需进行____处理后方有受精的能力,过程④中移植的早期胚胎处于____期。图示过程中发生基因重组的是____(填序号)。 

图2

(4) 为保证和牛的品质,防止近亲繁殖,需要对和牛进行DNA检测。目前常用“拔牛毛”的方法获取带毛囊的牛毛进行检测,而不是用直接剪取牛毛进行检测,原因是____________。DNA检测首先需制备DNA荧光探针,过程如图2所示,在DNA酶Ⅰ作用下产生切口,随后在DNA聚合酶Ⅰ作用下,以荧光标记的______为原料,合成荧光标记的DNA探针。 

(5) 牛是反刍动物,消化道并不能分泌纤维素酶,但在其瘤胃中生活着大量的微生物,可以帮助牛消化纤维素,这些微生物与牛的关系是____。 

  (1)在培育转入甲型H1N1病毒抗体基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是_____________，②过程常用的方法是_____________。

  (2)转入甲型H1N1病毒抗体基因的牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N1病毒抗体，在基因表达中，甲型H1N1病毒抗体基因的首端必须含有________，它是________识别和结合的位点。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________技术，培养出多头相同的转基因牛。

  (3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是________细胞，Ⅱ代表的细胞具有________________________________________的特点。

  (4)制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术。与动物细胞融合过程不同，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用________________对细胞进行处理。

如图为成熟精子的结构示意图，请据图回答问题：

(1)④由______________演变而成；在体外受精时，精子首先要进行获能处理，通常采用的体外获能方法有_______________和____________两种；卵细胞则要培养到______________期才具备与精子受精的能力。

(2)获能的精子穿越放射冠和透明带，进入卵黄膜完成受精作用，会产生两次生理反应，阻止其他精子入卵，它们是_________、______________。

(3)人的体外受精胚胎在4个细胞阶段就可以移植，而牛、羊一般要培养到_______________阶段才移植。通过胚胎培养获取胚胎干细胞，常从囊胚中分离__________的细胞，再继续培养扩增。

下图是利用生物工程技术生产人生长激素的示意图。质粒上的Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因，限制酶PstI、EcoR I和Hind Ⅲ切割形成的末端均不相同。请据图回答：

（1）将人生长激素基因导入小鼠体内来生产生长激素。图中对供体雌鼠甲用促性腺激素处理一段时间后与雄鼠乙交配，然后通过手术的方法从雌鼠甲的___________中取出受精卵。

（2）①过程不能利用人的皮肤细胞，其根本原因是_____________________________。

（3）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，切割质粒时应选用的酶是_________________________________。

（4）大肠杆菌细胞内应不含_________________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。

（5）如果从限制酶Pst I、EcoR I和HindⅢ任选两种酶对质粒进行切割，均会将质粒切成两段，则形成的DNA片段有____________种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段占___________。

（6）按照图示的操作，将三角瓶中的大肠杆菌先接种到甲培养基上，然后分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如乙、丙图所示。据图分析丙培养基中含人生长激素基因的菌落有_________个。

研究人员利用小鼠(2N＝40)的单倍体ES细胞(只含一个染色体组)，成功培育出转基因小鼠。其主要技术流程如下图所示：

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶，箭头指向的位置为限制酶的切割位置；Amp^r是氨苄青霉素抗性基因，Neo^r是G418抗性基因。

 (1)重组质粒上的抗生素抗性基因可作为_________，其作用是有利于筛选出含有目的基因的细胞。氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo^r的小鼠细胞，结合上图推测，过程①选用的2种限制酶是_______(填图中的编号)，图中③处的培养液应添加_______(选填“氨苄青霉素”或“G418”)。

(2)若图中过程①选用的2种限制酶识别序列和切割位置分别是和，则经这两种限制酶切割后所产生的黏性末端是__________。此时，图中过程②应选用___________(选填“E·coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”)。

(3)据图分析，细胞乙内除线粒体DNA外，还有________个DNA分子；细胞乙发育成桑椹胚的过程中细胞分裂方式是_________，将细胞乙培养成桑椹胚的技术称为________技术。

控制哺乳动物的性别对于畜牧生产有着十分重要的意义．根据牛的X精子的DNA含量比Y精子的高出4%左右，利用这一差异人们可以借助特殊仪器分离精子，从而有效控制性别，再通过胚胎工程技术就可培育出所需性别的试管牛（如图所示）．

请根据以上信息回答下列问题：

（1）图中的过程①是指__________，要将分离得到的精子经过______处理，同时卵母细胞应培养至__________________，方可完成该过程。

（2）在①过程中首先发生__________反应，穿越放射冠和透明带，透明带反应和___________是防止多精入卵的两道屏障。

（3）在体外将受精卵培养至_______________期时可用于移植，培养过程中需给予一定量的O₂以_________________________。

（4）受体母畜对移入子宫的外来胚胎基本上不发生____________________，这为胚胎在受体内的存活提供了可能．

（5）SRY基因是性别决定基因，据此可用____________________技术对移植前的胚胎进行性别鉴定，确保得到所需性别的试管牛。

亚麻酸(ALA)能够促进卵母细胞体外成熟和囊胚发育。为了给水牛体外胚胎产业化生产中合理使用亚麻酸提供理论依据,科研人员研究了不同浓度的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟、早期胚胎发育的影响,分析回答:

①卵母细胞的收集和体外培养:从屠宰场水牛的卵巢中收集并处理卵母细胞,随机分成5组,分别置于不同浓度亚麻酸的培养液中,在39 ℃、5%CO₂的培养箱中培养2224 h。

②卵母细胞成熟判断:在显微镜下观察卵母细胞,判断其是否成熟,统计结果如表1。

③体外受精:在受精溶液中进行体外受精后,用显微镜观察判断是否完成受精。

④早期胚胎培养:将受精卵移入胚胎培养液中培养4448 h后检查分裂情况,每隔48 h更换一次培养液,第59 d观察囊胚发育情况,统计结果如表2。

(1) 步骤①中,细胞培养箱中加5%CO₂的作用是___________。 

(2) 步骤②中,成熟卵母细胞内染色体的行为特征是____________。步骤③中,判断是否受精的依据是_____________________。 

(3) 步骤④中,受精卵经过__________(时期)发育成囊胚,培养过程定期更换培养液的目的是______________。 

(4) 根据实验数据分析,亚麻酸溶液为200 μmol·L^-1时,对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育起________作用。 

(5) 本实验结果表明,____的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育都较有利,其判断依据是 _________。 

下图为胚胎移植过程示意图，请回答以下问题。

（1）胚胎移植技术中对甲的要求是                                  。

（2）过程①是___________________________。

（3）过程③常用促性腺激素处理，以达到                       的目的。

（4）从丙获得的精子需要经过                 处理后，才具有受精能力。

（5）精子和卵细胞在共同培养过程中，一般只有一个精子能够进入卵细胞，

这依赖于                           和卵细胞膜反应这两道屏障。

（6）欲得到更多的后代牛丁，可将收集得到的胚胎进行分割，对囊胚进行分割时要求将内细胞团均等分割，否则会影响                                

（1）相同的胚胎干细胞，“克隆”的结果各种各样，有的是神经细胞、有的是血细胞、有的是肌肉细胞，其本质原因是________的结果；

（2）③构建的重组细胞发育的过程中，细胞开始分化发生在________期，从细胞水平上看，卵裂的分裂方式是________________；

（3）在体外培养条件下，⑤胚胎干细胞具有增殖能力并保持________状态；

（4）治疗性克隆所用的主要技术是________和胚胎干细胞培养，要想获得基因型完全相同的胚胎，可采用________________技术；

（5）治疗性克隆解决了临床上________和________的问题。