青蒿素是从黄花蒿茎叶中提取的抗疟疾药物。通过组织培养获得青蒿素的途径如图所示。请回答：

 （1）图中①和②分别表示黄花蒿组织培养过程中细胞的________和________过程。

（2）配制生芽培养基时生长素比细胞分裂素的比值应较________（填“高”或“低”）。配制培养基时通常加入凝固剂________。配制后还须用________法对培养基进行灭菌。外植体在接种前通常可用体积分数为________的酒精进行消毒。

（3）为了得到高产细胞系，通常要用酶解法获得原生质体，用________酶和________酶在0.5～0.6moVL的________溶液环境（较高渗透压）下去壁。

（4）科研人员利用转基因技术用细菌作为工程菌获得青蒿素的前体青蒿酸。先将目的基因与含有抗青霉素基因的质粒形成________，再与细菌菌液混合导入目的基因。用玻璃刮刀将稀释后的菌液用________法接种到含________的固体培养基上，经培养形成________，再进一步筛选和培养。若最终能从细菌中提取到________，则说明转基因成功。

人参是一种名贵药材，具有良好的滋补作用。口服α-干扰素在慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤的治疗中有一定疗效。下图为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，EcoRⅠ、BamHⅠ为限制酶，它们的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：

（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是            。科研人员还在两种引物的一端分别加上了              和             序列，以便于后续的剪切和连接。

（2）过程②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有             ，过程③中需先               处理根瘤农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（3）过程④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过              过程获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是                   。

（4）科研人员认为，将转干扰素基因的人参愈伤组织加工成的药物比单纯干扰素的疗效要好，其依据是                 。

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如下图所示。则用        和       酶处理两个基因后，可得到      端与       端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入右上图所示Ti质粒的T-DNA中，构建                并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含            的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是                     ，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过                 技术，可培育成转基因油菜植株。

（4）用             法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员利用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图表示EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点。回答下列问题：

(1)根据图中EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶的切割位点分析，该工程中最不适宜用来切割外源DNA获取目的基因的限制酶是      ，原因是      。将切割后的质粒和目的基因连接起来需要      酶。构建好的重组质粒在目的基因前要加上特殊的启动子，它是     识别和结合的部位。

(2)研究发现，如果将该凝乳酶第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是      。该生物工程技术对蛋白质结构的设计和改造，必须通过基因来完成，原因是              

【生物—选修3：现代生物科技专题】

  科学家从病死的家禽和候鸟体内分离到了H5N1禽流感病毒，用以生产可以预防和治疗禽流感的抗体，下图为单克隆抗体制备过程示意图，图中A～G分别表示生物技术或细胞名称，请回答有关问题：

（1）若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的细胞，C过程不同于诱导植物原生质体融合的常用诱导因素是＿＿＿＿＿＿。

（2）假设仅考虑某两个细胞的融合，则可能形成3种类型的D细胞，因此需用＿＿＿＿培养基筛选出＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的E细胞用于培养。

（3）在动物细胞培养过程中培养液中必须通入O₂和CO₂，通入CO₂的目的是＿＿＿＿。随着细胞分裂次数的增多，就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的＿＿＿＿，需要用胰蛋白酶等处理使细胞从瓶壁上分离下来。

（4）如果将单克隆抗体基因导入奶牛受精卵，再通过早期胚胎培养和＿＿＿＿＿＿＿＿，可获得多头奶牛，从而从乳汁中提取更多的抗体；欲获得活性更强的抗体，可通过＿＿＿技术对基因进行修饰，以实现目的。

 (1) 请写出两项图中涉及到的现代生物技术：____________________。

   (2) 研究人员根据已知的_________，采用化学合成方法获得了胰岛素基因。

   (3)图中由A培育至具有凤梨风味的绿草莓幼苗的过程，体现植物细胞的               。

   (4) 转基因技术和细胞工程在动植物中都有广泛应用，但是，胚胎工程只是指对动物的____________所进行的多种显微操作和处理技术。

   (5) 不断恶化的生态环境，正在对人类的生存和发展构成严重的威胁。因此，通过生态工程可对遭到破坏的生态环境进行        。生态工程建设的目的是遵循自然界       的规律，充分发挥资源的生产潜力，防止____________，达到生态效益与经济效益的同步发展。生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出两项它遵循的基本原理：_____________________________________。        

  2．某家族有种单基因遗传病，其遗传系谱图如下。请分析回答有关问题：

  （6）为研究其发病机理，通常采用       技术获得大量致病基因，该技术成功的关键是要有                 酶。

   （7）为诊断2号个体是否携带致病基因，通常采用的分子生物学检测方法是          。

   （8）该病会导致病人免疫能力下降，被病毒感染后的治疗需要大量的抗体。一般可通过动物细胞工程技术制备单克隆抗体：先获得既能迅速大量繁殖又能产生专一抗体的        ，然后将其注射到小鼠腹腔内增殖或在体外利用       (技术)进行大规模培养。临床使用的小鼠免疫后制备的鼠源性单克隆抗体最主要的优点在于          ，但存在一些弊端，其中之一是会引起人体抗鼠源抗体反应，这时的鼠源性单克隆抗体在免疫学上被称为        。5号个体在连续隔周注射某种鼠源性单克隆抗体治疗一种病毒感染性疾病，开始病毒量明显减少，一段时间后，这种病毒量又开始上升，排除病毒变异的因素，上升原因还可能是人体产生了              ，使鼠源抗体不能发挥抗病毒的作用。

   （9）如果要体外培养个体8的胚胎干细胞且维持不分化的状态，应该在         细胞上或在添加           的培养液中培养。

牛奶中有机营养物质除蛋白质外还含有乳糖等成分，许多人体内缺乏乳糖酶，无法分解这些乳糖，喝牛奶常会导致腹胀、腹泻、腹痛等症状。科学家已成功培育出了转基因“低乳糖奶牛”。这种奶牛所产牛奶中不含乳糖或含量很低。其生产过程大致如下：

请回答下列问题

（1）在过程 ① 中构建基因表达载体时，需要获取仅在              细胞中特异性表达的基因的启动子，以使乳汁中的乳糖含量降低。构成启动子的基本单位是                 。

（2）将人的肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，常用的方法是                            。

（3）进行过程 ④ 操作前，需要对取自早期胚胎的滋养层细胞利用                   技术进行DNA分析，以鉴定其性别。为提高胚胎的利用率，可将                    期的胚胎进行分割。胚胎中滋养层细胞将发育成                     。

（4）人的肠乳糖酶基因在奶牛中是否成功表达，可以采用抗原—抗体杂交进行检测，其中的抗原是指                             

(1)htPA基因与载体用限制性核酸内切酶切割后，通过DNA连接酶连接，以构建            。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用        技术。

(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其        。采集的精子需要经过        ，才具备受精能力。

(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是        。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的        。

(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到        ，说明目的基因成功表达。

（1）实现②过程的常用方法是_________________。

（2）获得黑白花奶牛成纤维细胞后，利用______________技术扩增细胞，培养液中除了提供必要的营养物质之外，还需要添加_____________等天然成分。

（3）获得重组细胞④时，以去核卵细胞为受体细胞的原因是______________________。

（4）将早期胚胎移入代孕母牛体内之前，需要对代孕母牛进行_______处理，目的是______________________。

（5）要通过⑤过程获得较多的遗传同质早期胚胎，应采用______________技术，操作时应选择发育至__________期的胚胎，并将内细胞团___________。“织女”牛⑦进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产人类所需的赖氨酸，因而称为________________。

（1）PCR扩增人血清白蛋白基因使用的酶是         。要使人血清白蛋白基因在转基因奶牛的乳腺细胞中表达，应将其与          基因的启动子等调控组件重组。

（2）过程 ② 包括             技术和胚胎移植技术；可用           技术获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊。

（3）若要检测牛奶中是否含有人血清白蛋白，可采用                  技术。