(1) 由杂种细胞D培育成白菜—甘蓝植株,采用的技术手段是______,该过程说明植物细胞具有____。 

(2) 在d过程培养中,培养基的成分通常包括水、____、有机营养和____等,同时,在培养过程中,除必要的温度、光照和氧气等外界条件外,成功的另一个关键是操作过程中必须保证____。 

(3) 要获得图中白菜和甘蓝的原生质体,首先需要分别除去白菜和甘蓝细胞的细胞壁。现提供以下材料和用具:紫色洋葱鳞片叶、适宜浓度的蔗糖溶液、纤维素酶和果胶酶、蒸馏水、镊子、显微镜、载玻片等。请从中选择合适的材料,完成下面检验是否已除去细胞壁实验的方法步骤,并预测和解释实验结果。

主要实验步骤:

① 选取适宜浓度的蔗糖溶液,加入适量纤维素酶和果胶酶配制成的细胞壁分解液。其中选取适宜浓度的蔗糖溶液而不用蒸馏水的理由是:适宜浓度的蔗糖溶液____。 

② 检验细胞壁分解液除去细胞壁的方法。

第一步:用镊子撕取一小块紫色洋葱鳞片叶放在载玻片中央,滴加适量细胞壁分解液,制成临时装片,得到实验组装片。

第二步:__________。 

第三步:__________。 

结果预测和分析:__________。 

科学家从链霉菌提取抗除草剂基因(bar基因)，用来培育抗除草剂作物。回答下列问题：

(2)将种子的胚划伤，简称划胚。请说出农杆菌将bar基因导入划胚细胞的过程：____________________________________________。

(3)某兴趣小组要探究各种划胚方式(包括横划、纵划和穿刺)对bar基因导入大豆种子胚细胞效率的影响。请将有关实验步骤补充完整。

步骤1：_______________________________________________中培养23天。

步骤2：用_____________________技术鉴定萌发植株的细胞是否导入bar基因。

(4)下表是不同植物对除草剂耐受性研究的实验结果。据表分析可知，玉米对除草剂耐受性最大，判断依据是_____________________________。

人的血清白蛋白(HSA)在临床上需求量很大，通常从人血中提取。但艾滋病病毒(HIV)等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。如果应用基因工程和克隆技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白就成为可能。其大致过程如下：

Ⅰ.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精子，通过体外受精，形成受精卵；

Ⅱ.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵，形成重组细胞；

Ⅲ.电脉冲刺激重组细胞，促使其形成早期胚胎；

Ⅳ.将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

请回答下列问题：

(1)实验步骤Ⅰ中，在体外受精前，需要对奶牛的精子进行________处理。受精时，往往一个卵母细胞只能和一个精子结合，受精过程中防止多精入卵的生理反应包括________________________________________________________________________。

(2)实验步骤Ⅱ中，将人的血清白蛋白基因导入奶牛受精卵最为有效的方法是________。导入基因前，需要将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这一步骤的目的是__________________________________________________________________________________。

(3)实验步骤Ⅲ中,进行动物早期胚胎的体外培养时,培养液中除了含有各种无机盐和有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外,还要添加_____和动物血清。

(4)实验步骤Ⅳ中，应选择性别为________的奶牛胚胎进行移植。

北极比目鱼中有抗冻基因，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，请回答：

（1）利用过程①的方法构建的基因文库是________，除了从基因文库中获取目的基因以外，常用的获取目的基因的方法还有________和________。

（2）过程②中常需要使用限制酶和DNA连接酶，既能连接黏性末端又能连接平末端的DNA连接酶是_________________________。

（3）为使过程①获取的目的基因在番茄细胞中能够表达，在构建表达载体时，需要将目的基因插入_____________，并且需在目的基因的首端和尾端分别加入___________、__________。

（4）此题中将目的基因导入受体细胞的方法是_____________。

（5）要检测番茄的DNA上是否插入抗冻基因，应以_______________为探针，与番茄基因组DNA杂交；要确认抗冻基因是否在转基因番茄植株中正确表达，应通过_____________法检测转基因番茄植株中该基因的表达产物是否呈阳性。

在进行植物体细胞杂交时，首先需要去除细胞壁。现提供以下材料和用具：白色洋葱鳞片叶、紫色洋葱鳞片叶、适宜浓度的盐酸、适宜浓度的蔗糖溶液、纤维素酶、果胶酶、蒸馏水、镊子、显微镜、载玻片、盖玻片等。请你从中选取合适的材料配制成合理的细胞壁分解液，设计实验检验其除去细胞壁的效果，并预测和解释实验结果：

（1）实验步骤：

①首先选取________，配制成细胞壁分解液。这样选取的理由是______________________________________________________。

②检验细胞壁分解液除去细胞壁效果的步骤：（注意对照组的设置）

第一步：______________________________________________；

第二步：______________________________________________；

第三步：______________________________________________。

（2）实验结果的预测和解释：________________________________________________。

阅读下列资料，回答相关问题：

资料1：1958年，美国科学家将胡萝卜韧皮部的细胞放在培养基中培养，得到了完整植株，并能开花结果。

资料2：葡萄糖异构酶在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸为目标氨基酸后，用有效方法以脯氨酸替代甘氨酸，结果其最适反应温度提高了10～12 ℃，使蛋白质空间结构更具刚性。

资料3：“试管婴儿”自诞生就引起了世界科学界的轰动，甚至被称为人类生殖技术的一大创举。也为治疗不孕不育症开辟了新途径。

（1）资料1中所运用的技术手段是　　　　　。（1分）由离体的细胞获得完整植株，需经过　　　　　　　　　　　　过程。这项技术可以高效快速地实现种苗的大量繁殖，因此叫做植物的　　　　　　　技术。

（2）资料2属于　　　　　　　（1分）工程的范畴。该工程是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种　　　　　　　的技术。在该实例中，引起葡萄糖异构酶空间结构改变的根本原因是　　　　　　　发生了改变。

（3）资料3中的“试管婴儿”，并不是真正在试管中长大的婴儿，它可以理解成由实验室的试管模拟人体　　　　　　　　（1分）功能。它实际上结合了体外受精、　　　　　　　　和　　　　　　　　等多种技术手段。

　　　表　亲本及融合子细胞体积和DNA含量的比较

(1) 步骤一:制备原生质体。培养C1、M1单倍体亲株,加入一定量的0.5%的蜗牛酶液,保温处理一段时间,在一定浓度的高渗缓冲液洗涤,以确保获得更多的原生质体。

①本实验中,蜗牛酶液的作用是_。 

②在无菌条件下,用____(A:高渗缓冲液、B:低渗缓冲液、C:生理盐水)洗涤,以确保获得更多的原生质体。 

③改变蜗牛酶液浓度进行多组实验,结果见图1,分别计算酶浓度为1和1.5时的形成率与再生率,相比较酶浓度为____时更适宜。 

(2) 步骤二:诱导原生质体融合。取C1、M1原生质体悬浮液等量混合,离心去除上清液,加入一定量40%的____溶液,30 ℃保温20 min,镜检并观察融合情况。 

(3) 步骤三:融合子的鉴定。测定细胞体积及DNA含量,结果见表1,从中挑选出融合子Z13、Z15、Z19、Z29,理由是__________________。 

图3　融合子Z29与亲株总酸降解能力的比较

细胞融合技术有着广泛应用。下图为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题

（1）若a、b分别是基因型为yyRr和YYrr两个玉米品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上。科学家分别将它们的花粉除去细胞壁，然后诱导其融合，再把这些融合细胞进行培养，培育出了玉米新品种。

 ①这两个品种的花粉可用化学诱导剂诱导融合，共可产生___________种基因型的融合细胞（仅考虑两两融合），这些融合细胞经过____________技术可以得到玉米新品种。

 ②若想培育出基因型为yyRR的玉米植株，也可直接用yyRr植株的花粉培养得到__________幼苗，再经过__________处理并筛选获得，这种方法叫做________。

（2）若a、b表示番茄和马铃薯两种植物的体细胞，a、b细胞融合之前，要纤维素酶和果胶酶酶处理后得到_________________；诱导植物细胞融合的化学方法是_________________。

（3）若a、b分别为骨髓瘤细胞和已免疫的B淋巴细胞，请据图回答：

  ①为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的d细胞，其特点是_________。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有_______________________等特点。

   ②下列各图表示单隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来_______________。

洋葱是常用的实验材料,它的叶分为两种,管状叶伸向空中,能进行光合作用,鳞片叶层层包裹,富含营养,如图1所示。回答下列问题:

(1)观察植物细胞的质壁分离和复原所用的最佳实验材料是____________。该实验的自变量是____________。

(2)观察DNA、RNA在细胞中的分布所用的最佳材料是_____________，该材料优于其他部分的原因是_______。

(3)若观察植物细胞的有丝分裂,所用的理想材料为________。如果在观察细胞有丝分裂实验中的光镜下看到的细胞如图2所示,造成这种情况的原因可能是_________。

①取材位置不合适　②取材时间不合适　③制片时压片力量不合适　④解离时间不合适　⑤视野选择不合适

(4)如果进行叶绿体色素的提取,则可以用________作实验材料。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。图11是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答：

（1）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用______________处理土壤农杆菌，使其处于感受态。

（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够_______________________的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的_______________上，最终形成转基因植株。

（3）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和_____________的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据________________的核苷酸序列设计特异引物，以________________为模板进行第一轮扩增。

（5）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

①对照组应饲喂等量的_______________________________。

②据表分析，______________________________差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。