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            • 1. 下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述,错误的是(  )
              A.用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量相近
              B.DNA析出过程中,搅拌操作要轻柔以防DNA断裂
              C.预冷的乙醇可用来进一步纯化粗提的DNA
              D.用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热
            • 2. 利用基因编辑技术将病毒外壳蛋白基因导入猪细胞中,然后通过核移植技术培育基因编辑猪,可用于生产基因工程疫苗。如图为基因编辑猪培育流程,请回答下列问题:
              (1)对1号猪使用______处理,使其超数排卵,收集并选取处在______时期的卵母细胞用于核移植。
              (2)采集2号猪的组织块,用______处理获得分散的成纤维细胞,放置于37℃的CO2培养箱中培养,其中CO2的作用是______。
              (3)为获得更多基因编辑猪,可在胚胎移植前对胚胎进行______。产出的基因编辑猪的性染色体来自于______号猪。
              (4)为检测病毒外壳蛋白基因是否被导入4号猪并正常表达,可采用的方法有______(填序号)。
              ①DNA测序
              ②染色体倍性分析
              ③体细胞结构分析
              ④抗原-抗体杂交
            • 3.
              甲型流感病毒为RNA病毒,易引起流感大规模流行。我国科学家在2017年发明了一种制备该病毒活疫苗的新方法,主要环节如下。
              (1)改造病毒的部分基因,使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力。以病毒RNA为模板,逆转录成对应DNA后,利用 ______ 技术扩增,并将其中某些基因(不包括表面抗原基因)内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列。与改造前的基因相比,改造后的基因表达时不能合成完整长度的 ______ ,因此不能产生子代病毒。将该改造基因、表面抗原等其他基因分别构建重组质粒,并保存。
              (2)构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。设计合成一种特殊tRNA的基因,其产物的反密码子能与(1)中的终止密码子配对结合,并可携带一个非天然氨基酸(Uaa)。将该基因与 ______ 连接后导入宿主细胞。提取宿主细胞的 ______ 进行分子杂交鉴定,筛选获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞。
              (3)利用转基因宿主细胞制备疫苗。将(1)中的重组质粒导入(2)中的转基因宿主细胞,并在补加 ______ 的培养基中进行培养,则该宿主细胞能利用上述特殊tRNA,翻译出改造病毒基因的完整蛋白,产生大量子代病毒,用于制备疫苗。
              特殊tRNA基因转录时,识别其启动子的酶是 ______ (单选)。
              A.病毒的DNA聚合酶  B.宿主的DNA聚合酶
              C.病毒的RNA聚合酶  D.宿主的RNA聚合酶
              (4)上述子代病毒不能在正常宿主细胞中增殖,没有致病性,因此不经灭活或减毒即可制成疫苗。与不具侵染性的流感病毒灭活疫苗相比,该病毒活疫苗的优势之一是可引起 ______ 免疫,增强免疫保护效果。
            • 4.
              回答下列问题:
              (1)博耶(H.Boyer)和科恩(s.Cohen)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除证明了质粒可以作为载体外,还证明了 ______ (答出两点即可)。
              (2)体外重组的质粒可通过Ca2+参与的方法导入大肠杆菌细胞;而体外重组的噬菌体DNA通常需与组装成完整噬菌体后,才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞。在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中,可作为重组噬菌体宿主细胞的是 ______ 。
              (3)真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时,表达出的蛋白质可能会被降解,为防止蛋白质被降解,在实验中应选用 ______ 的大肠杆菌作为受体细胞,在蛋白质纯化的过程中应添加 ______ 的抑制剂。
            • 5.
              用XhoⅠ和SalⅠ两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段,酶切位点及酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是(  )
              A.图1中两种酶识别的核苷酸序列不同
              B.图2中酶切产物可用于构建重组DNA
              C.泳道①中是用SalⅠ处理得到的酶切产物
              D.图中被酶切的DNA片段是单链DNA
            • 6.
              关于还原糖、蛋白质和DNA的鉴定实验,下列叙述正确的是(  )
              A.在甘蔗茎的组织样液中加入双缩脲试剂,温水浴后液体由蓝色变成砖红色
              B.在大豆种子匀浆液中加入斐林试剂,液体由蓝色变成紫色
              C.提取DNA时,在切碎的洋葱中加入适量洗涤剂和食盐,充分研磨,过滤并弃去滤液
              D.将DNA粗提物溶解在2mol/LNaCl溶液中,加入二苯胺试剂,沸水浴后液体由无色变成蓝色
            • 7.
              为生产具有特定性能的α-淀粉酶,研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656个碱基对),利用基因工程大量制备α-淀粉酶,实验流程见右图。请回答下列问题:

              (1)利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前,需先获得细菌的 ______ 。
              (2)为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接,需在引物的 ______ 端加上限制性酶切位点,且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点,主要目的是 ______ 。
              (3)进行扩增时,反应的温度和时间需根据具体情况进行设定,下列选项中 ______ 的设定引物有关, ______ 的设定与扩增片段的长度有关。(填序号)
               ①变性温度 ②退火温度  ③延伸温度 ④变性时间 ⑤退火时间  ⑥延伸时间
               (4)下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列:

              图中虚线框内mRNA片段包含 ______ 个密码子,如虚线框后的序列未知,预测虚线框后的第一个密码子最多有 ______ 种。
              (5)获得工程菌表达的α-淀粉酶后,为探究影响酶活性的因素,以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性,结果如下:
              缓冲液 50mmol/L Na2HPO4-KH2PO4 50mmol/L Tris-HCl 50mmol/L Gly-NaOH
              pH 6.0 6.5 7.0 7.5 7.5 8.0 8.5 9.0 9.0 9.5 10.0 10.5
              酶相对活性% 25.4 40.2 49.8 63.2 70.1 95.5 99.5 85.3 68.1 63.7 41.5 20.8
              根据上述实验结果,初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为 ______ 。
            • 8.
              某种荧光蛋白(GFP)在紫外线或蓝光激发下会发出绿色荧光,这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5′末端,获得了L1-GFP融合基因(简称甲),并将其插入质粒PO,构建了真核表达载体P1,其部分结构和酶切点的示意图如下,图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。

              回答下列问题:
              (1)据图推断,该团队在将甲插入质粒PO时,使用了两种限制酶,这两种酶是 ______ 。使用这两种酶进行酶切是为了保证 ______ ,也是为了保证 ______ 。
              (2)将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后,若在该细胞中观察到了绿色的荧光,则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了 ______ 和 ______ 过程。
              (3)为了获得含有甲的牛,该团队需要做的工作包括:将能够产生绿色荧光细胞的 ______ 移入牛的 ______ 中,体外培养,胚胎移植等。
              (4)为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中,某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的 ______ (填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”)作为PCR模板。
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