完成下列相关填空

（一）某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示。

（1）土壤悬液先经80℃处理15分钟，其目的是筛选出             。

（2）在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行            ，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到单菌落，其周围出现透明水解圈，圈的直径大小与           强弱相关。

（3）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中         的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高                的利用率。

（4）利用物理或化学方法将植酸酶固定在          的介质上称为固定化酶。实验过程涉及两次蒸馏水洗涤反应柱的操作，其中第一次洗涤的目的是除去             。

（二）下图为绵羊多莉克隆过程，请回答有关问题。

（5）步骤1中若要获得较多数量的卵细胞，通常对母羊注射相关激素使其超数排卵。步骤2可通过降低           浓度，实现对乳腺细胞的营养限制性培养，可以得到大量的          期细胞，从而实现细胞分裂同步化。

（6）步骤3中科研人员采用         技术进行细胞融合，步骤4通过胚胎体外培养获得胚胎，待发育至              胚胎时进行移植，通常移植至代孕母羊的          部位。

（7）若要将目的基因导入乳腺细胞中，在扩增目的基因时，除利用PCR技术外，还可将目的基因所在的重组载体导入大肠杆菌中，利用大肠杆菌  ▲ 使其扩增。

（8）为获得大量的上述克隆羊，可用胚胎成纤维细胞进行体细胞克隆。因为胚胎成纤维细胞可进行           培养，理论上可获得无限只克隆羊。

I.自然界中，有许多植物含有天然香料，如薄荷叶中含有薄荷油。现用溥荷叶提取薄荷油。请回答有关问题：

（1）薄荷油是挥发性物质，提取薄荷油时应选用______（鲜、干）薄荷叶作原料，其原因是____________________。

（2）用萃取法提取薄荷油时，采用的溶剂是________，原理是_________________。

（3）用水蒸气蒸馏法提取薄荷油时，在油水混合物中加入氯化钠的作用是__________。常用于分离油层和水层的器皿是_________。分离出的油层中加入无水硫酸钠的作用是________，除去固体硫酸钠的常用方法是______。

II.将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，为预防乙肝开辟了一条新途径。请回答下列问题：

（1）获得乙肝病毒表面抗原基因后，常利用__________技术进行扩增。把基因转入农杆菌内时常用__________处理农杆菌，使之成为感受态细胞。

（2）使用农杆菌将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可将乙肝病毒表面抗原基因转移至草莓细胞中的________上。目的基因进入草莓细胞内并在草莓细胞内维持稳定和表达，这个过程称为____________。

（3）在基因工程操作过程中，需要用________酶和________酶构建基因表达载体，基因表达载体要有_________________，以便筛选出含有目的基因的受体细胞。

（4）在分子水平上，可采用_________________的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原。

某种荧光蛋白(GFP)在紫外线或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5’末端，获得了L1-GFP融合基因(简称甲)，并将其插入质粒PO。构建了真核表达载体P1,其部分结构和酶切点的示意图如下，图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。

（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒PO时，使用了两种限制酶，这两种酶是___________.使用这两种酶进行酶切是为了保证___________,也是为了保证___________.

（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色的荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了______________和______________过程。

（3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的______________移入牛的__________中，体外培养，胚胎移植等。

（4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的_______(填”mRNA””总RNA”或”核DNA”)作为PCR模板。

党的十九大报告指出要“大力度推进生态文明建设……全面节约资源有效推进，能源资源消耗强度大幅下降。重大生态保护和修复工程进展顺利，森林覆盖率持续提高。生态环境治理明显加强，环境状况得到改善”。请回答下列相关问题：

（1）生态工程是对________进行修复重建，对________进行改善，促进人和自然的和谐发展。

（2）全面节约资源有效推进，能源资源消耗强度大幅下降很大程度上得益于实行“________”的原则，从而实现废弃物的资源化。

（3）实行生态工程，很多时候还需要考虑人文关怀、贫困地区的收入等问题，才能很好的解决“前面造林，后面砍林”的现象，这遵循的是生态工程的________原理。

（4）在保护濒危植物方面，运用了很多技术，比如微型繁殖运用的是________技术，其原理是________。

（5）在处理城市生态系统垃圾时，采用了生物治理法，分解者处理垃圾的相关目的基因从分解者体内用酶切割下来，再与________相连导入受体菌。

分析材料回答下列现代生物科技方面的问题：

⑤若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是__________________。

③在哺乳动物核移植的过程中，若分别以雌性个体和雄性个体的体细胞作为核供体，通常，所得到的两个克隆动物体细胞的常染色体数目____________（填“相同”或“不相同”），性染色体组合____________（填“相同”或“不相同”）。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点．

​（6）基因工程的四个操作步骤是___________、____________、____________、和____________。

番木瓜有较高的营养价值和医用价值，但极易感染番木瓜环斑病毒（PRV）．科研人员通过现代生物技术大量培育抗病毒番木瓜并获得其中的有效成分，请根据所学知识回答下列问题：

（1）PRV是一种RNA病毒，科研人员提取该病毒的核酸，经反转录得到PRVCP基因（目的基因），利用目的基因构建     ，其中的终止子能使 过程在所需要的地方停下来．将目的基因导入番木瓜细胞时，常用     法，该方法需将目的基因插入到 的T﹣DNA上，目的基因在番木瓜细胞中表达后，使受体细胞能有效抵抗PRV的侵染．

（2）要获得抗PRV番木瓜植株，需在   的人工控制条件下，将受体细胞培养在人工配置的培养基上，给予适宜条件，诱导其产生 、丛芽，最终形成完整的植株，体现了细胞的           。

（3）为了检测目的基因是否表达，需从转基因番木瓜中提取       ，用相应的抗体进行检测，该方法称为       法．

（4）上述生物技术包括转基因技术和植物细胞工程中的      技术．

(1)图中对良种奶牛进行处理时用到的激素      ,①过程必须用到      酶,②过程使用的是             酶。④表示基因工程中         过程;若方法C是最常用的将目的基因导入动物细胞的方法,则方法C是           。 

(2)图中采用的生物工程技术A和B分别是指                 和        。 

(3)为实现人血清白蛋白基因在转基因牛E的乳腺细胞中表达，应让该血清白蛋白基因和 的启动子等调控组件结合在一起。如果转基因牛E的牛奶中含有               ,则说明人血清白蛋白基因在个体水平已表达成功。 

（1）用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒         ，选择的限制酶是          。

（2）如果选择的质粒与目的基因重组成功，并且在受体细胞中能正常表达，则所形成的重组质粒用EcoRI完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有        或         。

（3）将基因表达载体导入大肠杆菌时，可将大肠杆菌先用        处理。导入大肠杆菌后，为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，在普通琼脂培养基中还需加入        ，形成的菌落颜色为           。

（4）如果要检测导入目的基因的大肠杆菌是否合成相应的蛋白质，可以采用        法。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图1：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的                        。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为                                              。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的                        。构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取                      作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为                      。

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发                     色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否导入受体细胞，可以采用                      方法检测。