转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表示四种限制酶的识别序列及酶切位点，据图回答下列问题。

（1）若要获得抗病基因，可用_____________限制酶切，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割，因为若在SmaⅠ位点进行切割会_________________。切割质粒与获取目的基因用的是___________（相同、不同）的限制酶。切割好的质粒与目的基因需要在_______________酶的作用下形成含抗病基因的重组DNA分子。

（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有__________________基因作为标记基因。

（3）图中将重组DNA分子导入香蕉受体细胞用到的方法是_____________法。

（4）为了进一步确定目的基因是否翻译成蛋白质，可用的检测方法是________。

（5）图中导入抗病基因的香蕉组织块一般需要通过________________________的方法，可培育成能表现新性状的植株。图中①到②表示______过程，②到③表示______过程。

（1）各代号表示的育种类型中：①表示________，③表示________。

（2）③⑦过程用到的药剂是________，原理是______________________________。

（3）若⑤过程是杂交，产生的AAA植株，其体细胞含染色体数目是________，该植株所结果实无子的原因是____________________。

（4）⑥过程中用到的工具酶是____________________________。AAA的细胞成功接受抗虫基因B后，经植物组织培养产生幼苗，移栽后长成AAAB的抗虫新品种植株，这种变异属于________。

为探究SHH基因与角化囊肿发生的相关性，科研人员利用SHH基因的非模板链转录合成的RNA作为探针，进行分子杂交实验，以检测SHH基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如下图（Amp表示氨苄青霉素抗性基因；LacZ基因被SHH基因插入后不表达）。

请回答：

（1）获得大量目的基因常用________技术，其原理是_________。

（2）步骤②中，用Ca^2＋处理大肠杆菌，使之成为________细胞，然后导入重组载体。实验中，用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌，未导入质粒的细菌将会死亡，原因是这些细菌不含有________基因。

（3）能表达LacZ基因的大肠杆菌在含有IPTG和X-gal的培养基上会形成蓝色菌落，易于识别。根据上述原理可以初步判断_______（填“蓝色”或“白色”）菌落中的大肠杆菌为重组菌。

（4）将制备的探针加入角化囊肿切片中，探针将与________形成杂交带，进而判断SHH基因的转录情况。

（5）除了基因工程外，细胞工程和胚胎工程也在人类生活中发挥了巨大作用。例如“试管婴儿”自诞生就引起了世界科学界的轰动，甚至被称为人类生殖技术的一大创举。也为治疗不孕不育症开辟了新途径。“试管婴儿”的诞生实际上结合了________、早期胚胎培养、胚胎移植等多种技术手段。再如，通过动物细胞杂交技术制备的单克隆抗体具有__________和灵敏度高等特性，因而广泛应用于疾病的检测、肿瘤的定位等方面。

绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，可以合成一种抗TMV，蛋白，叶片对TMV具有抗感染性。烟草是具有重要经济价值的双子叶植物，由于TMV的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草，主要流程如下图所示。

（1）理论上，基因组文库含有生物的________________基因；而cDNA文库中含有生物的________________基因。

（2）科学家从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因。图中①过程表示____________。

（3）基因工程最核心的步骤是____________，④过程将重组Ti质粒导入烟草体细胞的常用方法____________。

（4）由图分析，在过程③构建的重组Ti质粒上应该含有的标记基因是____________基因，它的作用是____________。

（5）过程⑥可采取____________的方法，检测植株是否合成了抗TMV蛋白。在个体水平的鉴定过程中，可通过____________的方法来确定植株是否具有抗性。

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图，请回答相关问题：

（1）过程①获得重组胚胎之前需要通过__________________技术获得重组细胞，接受细胞核的去核卵母细胞应该处于___________________时期。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其_______________分离出ES细胞。步骤③中，需要构建含有干扰素基因的__________________。

（3）将基因导入ES细胞常用的方法是________________________。体外诱导ES细胞向不同方向分化是利用了ES细胞的_________________。

（4）为检测干扰素基因的表达情况，可采用__________________方法，若有杂交带出现，表明目的基因已成功表达。

回答下列（一）、（二）小题：

（一）天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下图。

（1）在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，这是因为酶         。

（2）在酒精发酵阶段，发酵罐先通气，后密闭。通气能提高        的数量，有利于密闭时获得更多的酒精产物。若在酒精发酵环节中温度过低，带来的弊端是           。

（3）在醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层固体发酵法，发酵30天。工艺如图2：

①发酵过程中，定期取样测定醋酸杆菌密度变化，趋势如图3。据图2、3分析，与颠倒前相比，B层醋酸杆菌在颠倒后密度变化的特点是         ，由此推测，影响醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是        （至少答出两项）。

②乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。发酵过程中，发酵缸中         （答出什么时期的什么层）的醋醅有利于乳酸菌繁殖，积累乳酸。

③成熟醋醅中乳酸菌的种类、数量均明显减少，主要原因可能是        。

（二）如图为纯种荷斯坦小奶牛的繁殖过程，请据图回答下列问题。

（1）克隆动物培育过程与图示繁殖过程相比，特有的技术手段是       ，动物的这两种繁殖类型，实质性的区别在于后者仍是        。

（2）对供体母牛做超数排卵处理时，一般可采用         激素。

（3）如果要培育能产生某种药用蛋白的转基因荷斯坦奶牛，可采用具体的          技术将目的基因导入到受精卵中，并采用“         ”杂交的方法检测受体细胞中的目的基因是否表达。

（4）在转基因技术中，常需要对相关DNA的碱基序列进行测序。下图中甲、乙为DNA测序仪显示的图像，已知甲图显示的碱基顺序为TCGAAT，则乙图显示的碱基顺序为（   ）

A.TCGCAC        B.ACCGTG        C.ATTCAG        D.TCCGGA

下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素（由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素）的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的黏性末端各不相同，而Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。请据图回答以下相关问题：

（1）过程①所用细胞是________________，过程②所用的酶分别是___________________。

（2）人生长激素基因在经③处理之前需经过PCR扩增，扩增时应在PCR扩增仪中加入_______________________酶用以催化互补链的合成。

（3）过程④所用的酶是___________________________。

（4）若用限制酶PstⅠ切割，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，再将甲培养基上的单个大肠杆菌接种到丙培养基上，待形成12个菌落后，将相应菌落的一部分转接到乙培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。接种到培养基乙上能存活的是导入含_____________质粒的大肠杆菌。生产人生长激素的工程菌应从丙培养基的菌落中选取，选取的依据是_____________________。

如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点．据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________________（限制酶）同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含__________的培养基上进行。
（2）过程②代表的生物技术是__________，此技术对供体母牛、代孕牛进行选择后，并用激素进行的处理是_____________。如对囊胚阶段的胚胎进行切割，应注意____________________，以免影响胚胎的恢复和进一步发育。
（3）若转基因牛的乳汁中不含人乳铁蛋白，根据中心法则分析，其可能的原因是_______________________________。

科学家将人的生长激素基因与质粒重组后，导入牛的受精卵，并成功从牛奶中提取到了人生长激素，操作流程如下图所示，请据图回答。（已知限制酶I的识别序列和切点是－G↓GATCC－，限制酶II的识别序列和切点是－↓GATC－）。

       （1）获取目的基因的主要途径包括从已有物种细胞中提取和_____________。

       （2）据图分析，在构建重组质粒的过程中，目的基因用________________（填“限制酶I”或“限制酶Ⅱ”）进行了切割。

       （3）获能的精子和卵细胞相遇后首先发生____________反应，之后精子接触卵黄膜，并进一步与卵结合，在该过程中，_______________和____________________可以防止其它精子入卵。

       （4）图中“受体”是__________________________；“符合要求的个体”是指_____________________________。

       （5）将牛受精卵进行人工培养后，一般可选择__________________期的、发育良好的胚胎进行移植。

科学家从某无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答：

 ( 2 )也有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图。

①酶A是指________，酶B是指__________________________。

②图中Ⅰ表示________，对Ⅱ进行检测与鉴定的目的是______________，Ⅲ所指的细胞具有的特点是_______________。