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            • 1．

              根据以下实验内容回答问题：

               

              （1）在上述实验过程中，必须借助显微镜才能完成的是             （填序号）；必须经水浴加热的是             （填序号）。

              （2）由于实验材料用品或试剂所限，有时候需要设法替代。下列各项处理中正确的是         。 

               A.做⑦实验时，可用蒜叶代替洋葱根尖   

               B.做①实验时，可用甘蔗代替苹果 

               C.做⑤实验时，可用干净的细沙代替二氧化硅

               D.做②实验时，可用苏丹IV代替苏丹Ⅲ染液

              （3）在实验⑤中，进行色素层析操作时，要注意不能让                 触及层析液。

              （4）在上述实验中，常用到酒精的实验有②、⑤、⑥、⑦，其中酒精所起的作用分别是       、  

                            、              、               。

              难度：难
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            • 2．

              真核生物细胞内，大量DNA和蛋白质以及一些RNA等混杂在一起，难以分离。生物兴趣小组的同学为了获得纯度相对较高的DNA展开了实验探究。下图是根据鸡血中几种物质的析出情况绘制的曲线，请据图分析：


              （1）分离各种物质的基本思路是根据DNA和其他物质理化性质的不同而采取一定的方法，如图是从各种物质之间              的差异角度开展研究：

              a、取鸡血细胞悬液10ml，加蒸馏水20ml，同时用玻璃棒           （填“轻轻搅拌”或填“快速搅拌”）。过滤，取滤液，转移到塑料材质的大烧杯中。

              b、沿大烧杯内壁持续、缓慢地加入饱和硫酸铵溶液，用玻棒沿一个方向           （填“轻轻搅拌”或填“快速搅拌”），同时不断收集析出的物质。

              c、如果只要收集纤维蛋白，可采取的措施是         。

              d、先用饱和度40%的硫酸铵溶液析出绝大部分纤维蛋白和大部分球蛋白，再在饱和度约为          的硫酸铵溶液中析出DNA（既保证DNA提取量较大又避免其他杂质过多），与此同时析出的物质还有        。

              （2）如果要进一步去掉其他杂质，尽可能提高获得的DNA纯度，可采取的两种办法有：将DNA与球蛋白的混合物加入到         中，收集再次析出物；用          处理溶有DNA与蛋白质的溶液。

              难度：中等
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            • 3． 生物兴趣小组以苹果为材料开展细胞中DNA含量测定研究，主要实验流程如图，其中SDS（十二烷基硫酸钠）具有破坏细胞膜和核膜、使蛋白质变性等作用，苯酚和氯仿不溶或微溶于水，它们的密度均大水．请分析回答：

              （1）步骤①中苹果组织研磨前先经液氮冷冻处理的主要优点是    ．在常温条件下，也可向切碎的组织材料中加入一定量的    ，再进行充分搅拌和研磨．
              （2）根据实验流程可推知，步骤③、④所依据的原理是    ．
              （3）步骤⑤加入2～3倍体积的95%乙醇的目的是    ．
              （4）下面是某同学设计的DNA鉴定实验的主要步骤：
              ①取1支20mL试管，向其中先后加入2mol•L-1的NaCl溶液5mL和少量絮状DNA沉淀，用玻棒搅拌使其溶解．
              ②向试管中加入4mL二苯胺试剂，混匀后将试管置于50～60℃水浴中加热5min，待试管冷却后，观察溶液是否变蓝．
              请指出上面实验步骤中的两个错误：    、    ．
              （5）兴趣小组成员还以同种苹果的不同组织器官为材料，测定不同组织细胞中DNA的含量，结果如下表（表中数值为每克生物材料干重中DNA含量）：
              组织器官韧皮部形成层冬芽秋梢嫩叶成熟叶片
              含量/μg•g-180.00150.00160.00120.0070.00
              试从细胞分裂的角度，解释不同生物材料中DNA含量差异明显的原因    ．
              难度：中等
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            • 4． 利用生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得人凝血因子IV，用于血友病的治疗．请回答下列问题：
              （1）根据凝血因子IV基因上游和下游的碱基序列，可用 技术获取并扩增基因．构建该基因表达载体时，所用到的工具酶是 ，该基因表达载体中，凝血因子Ⅳ基因的上游和下游分别是 ．
              （2）将目的基因表达载体导入奶山羊受精卵的常用方法是 ． 受体细胞选用受精卵的优点是细胞大易操作、营养物质含量高和 
              （3）在体外胚胎培养时，应选用囊胚的 进行DNA分析，用于选择雌性胚胎．此期的胚胎也适于胚胎分割移植，此技术的优点是 
              （4）人凝血因子IV是一种胞外酶，该蛋白的加工是在 等细胞器上进行的．人凝血因子IV只在乳腺细胞合成的原因是 ．
              难度：中等
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            • 5． 现有两种同科不同属的农作物，甲作物高产不耐盐，乙作物低产但耐盐．欲培育出既高产又耐盐的植株，以适应于盐碱地栽培．请回答下面的问题：
              （1）采用 （填“杂交”、“嫁接”或“转基因”）方法可以达到上述目的，这种育种方法的优点是  ．
              （2）采用细胞工程育种的方法如下：

              ①甲、乙原生质体经诱导融合完成的标志是  ． 以胚状体为材料，经过人工薄膜包装得到的人工种子，在适宜条件下同样能够萌发成幼苗，与天然种子相比，人工种子具有哪些显著的优点？（请举出1条）  ．
              ②动物细胞工程应用较广泛的是单克隆抗体的制备，单克隆抗体最主要的优点是  ． 单克隆抗体的应用主要有两个方面，一个是作为 试剂，能准确 地识别各种抗原物质的细微差别，并跟一定抗原发生 ． 另一方面可以用于 和运载药物．
              难度：中等
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            • 6． 如图是利用现代生物技术改良草莓品系的过程：

              （1）将野生绿色草莓的叶片离体组织培养成四倍体试管苗的过程，体现了植物细胞的 性，此过程中秋水仙素的作用机理是 
              （2）①过程中欲获得抗虫草莓，可从蛋白酶抑制剂基因、生长素诱导基因中选择 作为目的基因，通常用 方法导入受体细胞，基因表达载体除包括目的基因外，还必须有 及标记基因等．
              （3）②过程可以先用花药离体培养分别获得抗虫草莓和凤梨草莓的单倍体，再利用 技术获得同时具凤梨风味和抗虫特性的六倍体草莓，该技术常用的酶有  ， 常用的化学诱导剂是 ．
              难度：中等
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            • 7． 图是利用基因工程方法培育抗虫棉的过程．请据图回答相关问题：

              （1）从苏云金芽孢杆菌的DNA上获取抗虫基因，需要用到的工具是  ， 此工具主要是从 生物中分离纯化出来的，它能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的 键断开．
              （2）构建重组质粒时，常用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上具有 ，它能把目的基因整合到受体细胞的 上．
              （3）E过程是利用 技术完成，要确定抗虫基因导入棉花细胞后，是否赋予了棉花抗虫特性，在个体水平上还需要做 实验；若要检测具有抗虫基因的棉花是否产生了相应蛋白，在分子水平上可利用 方法进行检测．
              难度：中等
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            • 8． 科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草．图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点．请分析回答下列问题：

              （1）在该过程中，研究人员首先获取了抗盐基因（目的基因），并采用 技术对目的基因进行扩增，该技术需要的条件是、酶、原料、模板，该技术必须用 酶；然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具有目的基因、启动子和终止子之外，还需具有 ．
              （2）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是 ．图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用 酶对外源DNA、质粒进行切割．
              （3）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是
              难度：中等
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            • 9． 2009年10月，我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书．图1表示该抗虫水稻主要培育流程，据图回答：

              （1）④过程应用的主要生物技术是 ；该技术的过程主要包括 和 两个阶段，利用的基本原理是  ．
              （2）杀虫基因（crylA）是人们根据几种Bt毒蛋白的分子结构，设计并人工合成的，这属于 工程技术范畴．
              （3）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造．图2是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），据图2分析：
              ①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入 ．
              ②人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的 （基因），保证T﹣DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于 ．第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等．
              ③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒．分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是 ．
              （4）若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端为 ， 则该酶识别的核苷酸序列是 ．
              难度：中等
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            • 10． 如图所示，质粒PBR322上含有青霉素抗性基因（XR）和四环素抗性基因（YR）．其中，XR内部含有限制酶KasI识别序列，YR内部含有限制酶FseI、HpaII、
              NaeI、NgoMIV识别序列，且这些识别序列在整个质粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列．
              （1）质粒PBR322的本质是 .FseI、HpaII、NaeI、NgoMIV中限制酶的作用特点是 
              （2）NaeI酶切目的基因和质粒，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作．之后，受体细胞的类型包含 （多选）
              A．抗青霉素、抗四环素         B．抗青霉素、不抗四环素
              C．不抗青霉素、抗四环素        D．不抗青霉素、不抗四环素
              （3）若用KasI和FseI联合酶切上述重组质粒，则可能产生的酶切片段数 ．
              A.2             B．3            C．4              D．5
              （4）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是 ．
              A．受精卵能使目的基因高效表达B．受精卵可发育成动物个体
              C．受精卵基因组更易接受DNA的插入D．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作
              （5）若目的基因模板链中的TGA序列对应1个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是 ．通过筛选出的受体细胞内，目的基因能成功表达的原因是 ．
              难度：中等
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