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            • 1． 在图所示的质粒PZHZ11（总长为3.6kb，1kb=1000对碱基因）中，lacZ基因编码β-半乳糖苷酶，后者催化生成的化合物能将变色的大肠杆菌染成蓝色．

              （1）若先用限制酶BamHⅠ切开pZHZ11，然后灭活BamHI酶，再加DNA连接酶进行连接，最后将连接物导入足够数量的大肠杆菌细胞中，则含3.1kb质粒的细胞颜色为    ；含3.6kb质粒的细胞颜色为    ．
              （2）若将两段分别用限制酶BamHI和BglHI切开的单个目的基因片段置换pZHZ11中0.5kb的BamHI酶切片段，形成4.9kb的重组质粒，则目的基因长度为    kb．
              （3）上述4.9kb的重组质粒有两种形式，若用BamHI和EcoRI联合酶切其中一种，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段；那么联合酶切同等长度的另一种重组质粒，则可获得    kb和    kb两种DNA片段．
              （4）若将人的染色体DNA片段先导入大肠杆菌细胞中克隆并坚定目的基因，然后再将获得的目的基因转入植物细胞中表达，最后将产物的药物单独注入小鼠体内观察其生物功能是否发挥，那么上述过程属于    ．
              A．人类基因工程   B．动物基因工程     C．植物基因工程   D．微生物基因工程．
              难度：中等
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            • 2． 油菜由白菜（2n=AA=20）和甘蓝（2n=CC=18）天然杂交进化而来，如何在短时间内提高油菜籽的产油率、改善油菜籽的品质是科学家研究的热门话题．请分析回答下列问题：
              （1）在利用植物体细胞杂交技术将白菜和甘蓝体细胞融合前，需用    除去各自的细胞壁，常用化学促溶剂    促进二者融合成杂种植物细胞．在由杂种植物细胞生成再生植株的过程中，细胞内最多含有    个染色体组．
              （2）研究发现，油脂的生成量与蛋白质的合成量呈反相关，主要控制基因（独立遗传）及代谢路径如图1．
               ①叶肉细胞中的丙酮酸主要来自    ．
               ②高油油菜的基因型为    ．基因型为MmNn的油菜自交，后代中宜于留种的纯合高油油菜占    ．
              （3）油酸为不饱和脂肪酸，能降低人体血液中胆固醇、减少患心血管病风险．F基因控制合成的油酸酯氢酶催化油酸形成饱和脂肪酸，转反义F基因油菜能提高菜籽油中油酸含量．
              ①利用油菜细胞的染色体DNA直接获取大量F基因的方法为    ．
              ②构建反义F基因表达载体时，需要    酶；将反义F基因表达载体导入油菜根细胞的方法除基因枪法外，还可利用    ．从图2看出，构建反义F基因表达载体时没有设计标志基因，目的是    ．
              ③Le启动子为种子特异性启动子，将F基因反向连接在Le启动子之后构建了反义F基因．检测转反义F基因油菜细胞内F基因转录的mRNA含量，结果表明，因杂交形成双链RNA，细胞内F基因的mRNA水平下降．由此推测，反义F基因的转录抑制了F基因的    （填复制、转录或翻译）过程．若F基因转录时，两条单链（a1、a2）中a1为转录的模板链，推测反义F基因转录时的模板链为    ．
              难度：中等
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            • 3． 科研人员通过基因工程实现了β-甘露聚糖酶基因在猪肠道野生酵母菌中的表达，使原来不能被猪利用的粗纤维在猪肠道内被分解成可直接吸收的单糖．如图为构建工程菌的部分过程，其中介导序列能引导载体整合到酵母菌的染色体DNA上．请回答：

              （1）①过程中需要的工具酶是    ，②③过程中需要的工具酶是    ．
              （2）同尾酶是指切割DNA分子后能产生相同黏性末端的限制酶，图中4种限制酶中属于同尾酶的是    ．
              （3）重组表达载体中的介导序列引导目的基因整合到酵母菌的染色体DNA上，其意义在于    ．
              （4）①过程从野生酵母菌染色体DNA中PCR扩增介导序列时，科研人员设计了如下一对引物：GAATTCGACCTCAAATCAGGTAGG和TTGCATTGACTTACACCTAGG，其中下划线部分序列的设计依据是    ，方框部分序列的设计目的是    ．
              （5）对重组表达载体进行酶切鉴定，假设所用的酶均可将识别位点完全切开．若使用EcoRⅠ和SalⅠ酶切，得到    种DNA片断．若使用EcoRⅠ和BamHⅠ酶切，得到    种DNA片断．
              难度：中等
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            • 4． 如图表示利用乳腺生物反应器生产某种动物蛋白的流程示意图，请分析回答：

              （1）中A、B分别表示    、    ．由A得到的基因编码区的脱氧核苷酸序列有     （答“一种”或“多种”），这是因为    ．
              （2）常用的方法是    ．通常将    时期的早期胚胎移植到受体内，为提高培育成功率，进行‚过程之前，对早期胚胎的处理是取其部分细胞用目的基因探针进行    检测．
              （3）要一次获得大量基因型相同的子代，可对早期胚胎进行    ，操作时需注意    ．
              （4）蛋白质工程中，需对蛋白质结构进行设计改造，必须通过基因修饰或基因合成来完成，而不直接改造蛋白质，原因是    ．
              （5）请说明转基因技术的利：    ，弊：    ．（各答出一点即可）
              难度：中等
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            • 5． 若某研究小组用普通绵羊通过转基因技术获得了转基因绵羊甲和乙各1头，具体见下表．
              绵羊性别转入的基因基因整合位置表现型
              普通绵羊♀、♂--白色粗毛
              绵羊甲♂1个A+1号常染色体黑色粗毛
              绵羊乙♂1个B+5号常染色体白色细毛
              注：普通绵羊不含A+，B+基因，基因型用A-A-B-B-表示．
              请回答：
              （1）A+基因转录时，在    的催化下，将游离核苷酸通过    键聚合成RNA分子．翻译时，核糖体移动到mRMA的    ，多肽合成结束．
              （2）为选育黑色细毛的绵羊，以绵羊甲、绵羊乙和普通绵羊为亲本杂交获得F1，选择F1中表现型为    的绵羊和    的绵羊杂交获得F2．用遗传图解表示由F1杂交获得F2的过程．
              （3）为获得稳定遗传的黑色细毛绵羊，从F2中选出合适的1对个体杂交得到F3，再从F3中选出2头黑色细毛绵羊（丙、丁）并分析A+和B+基因的表达产物，结果如图所示．不考虑其他基因对A+和B+基因表达产物量的影响，推测绵羊丙的基因型是    ，理论上绵羊丁在F3中占的比例是    ．
              难度：中等
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            • 6． 2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖．工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高．基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路．科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株．通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变．
              （1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是    ．
              （2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，用该双链cDNA进行PCR扩增，进行了30个循环后，理论上可以产生约为    个DNA分子，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的    ，获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列    （填“相同”或“不同”）．
              （3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图l、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．请回答：

              用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是    ，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是    识别结合位点．
              （4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取    技术．目的基因导入组织细胞后，通过    技术培育出青蒿幼苗．
              难度：中等
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            • 7． 某实验小组以洋葱组织为实验材料，进行DNA粗提取和鉴定的实验，实验主要过程如下图，回答下列问题：

              （1）步骤一中需加入一定量的洗涤剂和    对洋葱组织进行处理，加入前者是为了瓦解细胞膜结构，加入后者的目的是    ．将搅拌和研磨后的物质进行过滤，即可得到含有DNA的滤液．
              （2）步骤二是DNA纯化过程中的关键步骤，可以采用以下几种不同的方法：
              ①滤液中NaCl浓度在0.14mol/L时可分离出DNA，若要再次提纯，需要将其溶解在    mol/L的NaCl溶液中；
              ②通常会向DNA粗提取物中加入嫩肉粉，其目的是    ；
              ③将得到的DNA粗提取物放在60～75℃水浴中保温10～15min，蛋白质被破坏，但仍能得到纯度较高的DNA，说明了DNA    ．
              （3）步骤三中向滤液中加入DNA体积分数为95%的酒精的目的是    ，依据的原理是    ．得到纯净的DNA后，可利用DNA与    在沸水浴条件下发生显色反应，来对其进行鉴定．
              难度：中等
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            • 8． 严重复合型免疫缺陷症的基因治疗方法是：先从病人体内获得淋巴细胞进行体外培养，然后将腺苷酸脱氨酶基因利用逆转录病毒作为运载体转移到淋巴细胞，再筛选成功转移的细胞增殖培养，最后重新输入患者体内．回答下列问题：
              （1）体外培养淋巴细胞，应保证处于    环境，在合成培养基中通常加入适量的    等天然成分，培养应在含5%CO2的培养箱中进行，CO2的作用是    ．
              （2）该基因治疗过程是在逆转录病毒的    作用下，使RNA逆转录为DNA，与目的基因整合后插入到淋巴细胞基因组中．基因表达载体除含有目的基因外，还必须含有    等控制基因表达的信号序列．
              （3）淋巴细胞主要在人体的    （器官）中分化形成，并参与人体的    免疫．
              （4）淋巴细胞的DNA上是否插入了目的基因，一般用    标记的腺苷酸脱氨酶基因作为探针，进行DNA分子杂交检测．
              难度：中等
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            • 9． 如图为蛋白质工程操作的基本思路，请据图回答下列问题：

              （1）代表蛋白质工程操作思路的过程是    ，代表中心法则内容的是    ．（填写数字）
              （2）写出图中各数字代表的生物学过程的名称或内容：
              ①    ，②    ，③    ，④    ，⑤    ．
              （3）蛋白质工程的目的是    ，通过    来实现．
              （4）从图中可以看出蛋白质工程的基本途径与中心法则是    的．
              难度：中等
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