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            • 1. 枯草芽孢杆菌产生的蛋白酶在医药和化工等领域具有重要的价值。为筛选蛋白酶产量高的枯草芽孢杆菌菌株,分别将浸过不同菌株的提取液(a-e)及无菌水(f)的无菌圆纸片置于平板培养基表面,在37℃恒温箱中放置2-3天,结果如图1.图2是枯草芽孢杆菌的蛋白酶和其它酶的热稳定性数据(酶在不同温度下保温足够长的时间后,再测定其最适宜温度下的活性)。请回答问题:
              (l)在筛选枯草芽孢杆菌蛋白酶高产菌株时,培养基营养成分应包括水、无机盐、生长因子、葡萄糖、______。培养枯草芽孢杆菌时,常用摇床进行振荡培养,目的是______。
              (2)a-e中蛋白酶产量最高的菌株是______(用字母回答),判断依据是______。

              (3)在蛋白酶的生产过程中,通常先将发酵液在60-70℃保温一定时间后,再制备酶制剂。保温一定时间的目的是______。
              (4)质监局为了检验标有含该蛋白酶的加酶洗衣粉质量,设计了如图所示实验。如果实验结果是______,则说明该洗衣粉中含有蛋白酶。若用该实验来判断此酶活性大小可通过观察______实现。
            • 2.

              醚苯磺隆是常见的除草剂,在环境中难以降解。某实验小组从某农药厂的污泥中富集、筛选出了一株醚苯磺隆降解菌株MB-1,并研究了其降解效率。请回答下列问题:

              (1)该实验小组将取自生产醚苯磺隆农药厂废水处理池中的废水按5%的体积分数接入醚苯磺隆含量为200 mg/L的MSM液体培养基中,每3 d以5%的接种量接入新鲜的醚苯磺隆MSM液体培养基中,这一培养过程称为______________,其目的是____________________________________。

              (2)该实验小组将培养液进行梯度稀释后,将稀释倍数为103、10和105的培养液分别取0.1 mL接种到醚苯磺隆MSM固体培养基上,每个稀释倍数涂布三个培养基,最终形成的菌落数分别为627、622、658;58、62、63;3、6、7个,则原菌液每升含有的细菌数为__________个。若要检测水体中全部细菌(无论是否为活菌)的数目,应采用的方法是________。

              (3)研究发现当培养基中含有葡萄糖和醚苯磺隆时,MB-1菌株只利用易于摄取的葡萄糖作为能源和碳源,同时诱导产生一种能分解醚苯磺隆的关键酶,该实验小组研究了不同的葡萄糖浓度对MB-1降解醚苯磺隆能力的影响,实验结果如图所示。

              ①同时含有葡萄糖和醚苯磺隆的培养基比只含醚苯磺隆的培养基更有利于MB-1菌株的生长繁殖,其原因可能是___________________________________________________________________________。

              ②当葡萄糖浓度较低时,醚苯磺隆降解能力较弱的原因是______________________,最有利于醚苯磺隆降解的葡萄糖浓度为_____________。

            • 3.

              已有研究证实,在体外培养条件下耐药基因能够在不同种属的乳酸菌菌株中发生转移。鉴于此,科研小组对市售酸奶中的乳酸菌进行分离和鉴定,通过药物敏感性实验确定菌株的耐药谱,同时调查环丙沙星、庆大霉素、四环素等耐药基因在这些菌株中的分布情况,为乳酸菌的安全评价提供参考依据。请分析回答下列有关乳酸菌培养过程中的相关问题:

              (1) 本研究使用的细菌培养基中特别加入了一定量的碳酸钙,乳酸菌产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙生成可溶性的乳酸钙,从而在菌落周围形成溶钙圈。从功能角度分析,本研究使用的培养基属于______。 

              (2) 在利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时,锅内水加热煮沸后,必须____,以保证锅内气压上升、温度升至121 ℃,灭菌后的培养基应适当冷却后,在____附近倒平板。 

              (3) 在酸奶制作过程中要严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键,通常所指的发酵条件包括_____________(至少写出两项)。一般情况下含抗生素牛奶不宜制作酸奶,原因是_______________。 

              (4) “检测乳酸菌对环丙沙星、庆大霉素、四环素耐药性”实验中,____(选填“需要”或“不需要”)设置对照实验,培养基配制好后再分别接种____。 

              (5) 在统计菌落时,发现0.1 mL稀释倍数为105的稀释液在平板上的平均菌落数为40个,则每毫升样液中的乳酸菌数大约为____个。用此法测定的乳酸菌数量比实际活菌数量____,原因是______________。 

            • 4.

              水污染是全球性的环境问题,微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物,PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA,PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物,当PVA被分解时蓝绿色复合物消失,形成白色透明斑,请回答下列问题:

              (1)下表是筛选出能高效分解PVA的细菌的培养基配方,表中X物质最可能为_______________。实验中还应设置完全培养液对照组,将菌液稀释相同的倍数,对照组培养基上生长的菌落数目应明显__________(填“多于”或“少于”)选择培养基上的数目,从而说明选择培养基具有筛选作用。

              成分

              MgSO4

              蛋白质

              X物质

              琼脂

              用量

              g

              10 g

              7 g

              1 000 mL

              20 g


              (2)要测定土壤稀释液中微生物的数目,可在显微镜下用___________计数板直接计数。若将100 mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释104倍后,取0.1 mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面,测得菌落数的平均值为160个,空白对照组平板上未出现菌落,则100 mL原菌液中有PVA分解菌____________个,该方法的测量值与实际值相比一般会___________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。

              (3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌,培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入________用于鉴别PVA分解菌。若用上述培养基比较不同菌株降解PVA能力的大小,请用简洁的语言写出设计思路:_________________________________________________________________________________________________。

            • 5.

              为解决塑料袋(化学成分为聚乙烯)造成的“白色污染”这一问题,某同学试图从土壤中寻找一种能加速塑料袋自然降解过程的目的菌,以下是该同学从土壤中寻找并筛选目的菌的流程,请回答下列问题:

              (1)对培养基灭菌常用的方法是____________________。在接种前需要检测使用的培养基是否被污染,方法是______________________________________________________________。

              (2)Ⅰ号培养基属于________________(按功能分)培养基,其作用是使目的菌能“脱颖而出”。如图采用的接种方法为________________。Ⅱ号培养基从物理性质来看,________(填“能”或“不能”)添加琼脂。

              (3)该同学在稀释倍数为104的培养基中测得平板上菌落数的平均值为20.4,则每毫升样品中的菌落数是________个。(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)

              (4)假设该同学发现培养基上细菌数目过多而连成一片,说出一种可能的原因并提出合理的处理措施。原因:__________________;措施:_______________________________。

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