下列有关平板划线接种法的操作错误的是( )

回答下列(一)、(二)小题。

(一)请回答下列有关微生物培养、发酵过程中的相关问题。

(1)在“分离以尿素为氮源的微生物”的实验中，配制好的尿素固体培养基加上封口膜后用高压蒸汽灭菌方法灭菌，冷却后加入用_________漏斗过滤的尿素溶液。漏斗用后需用适宜浓度的___浸泡，再用蒸馏水冲洗，干燥后保存。 

(2)在“果汁中的果胶和果胶酶”实验中，可以用___(A.50%乙醇　B.70%乙醇　C.90%乙醇　D.95%乙醇)鉴别果胶。果胶酶可以从黑曲霉或______中提取，配制这些微生物的培养基时需要将pH调至____。

(3)果酒制作果醋过程中，通入空气需要经过_____过滤。果醋发酵结束的标志是pH_____。 

(二)下图表示动物细胞克隆和制备单克隆抗体的相关过程，请回答相关问题：

(1)过程①常应用____方法导入重组诱导基因后得到干细胞；部分干细胞经过诱导可分化成全身的不同组织或器官，说明这些细胞具有____性。在动物细胞培养过程中培养液中必须通入O₂和CO₂，通入CO₂的目的是__________。

(2)该过程中甲和乙细胞可经过生物诱导剂______的作用形成丙细胞。取一个丙细胞，放在含大量失去____的小鼠成纤维细胞的特定培养体系中培养，最后产生大量的细胞群，这种方法为____法。 

(3)下列关于经③和④过程得到单克隆抗体的叙述，错误的是_____。

A.该过程应用了细胞膜具有流动性的原理    B.该过程应用了动物细胞融合和动物细胞培养技术

C.丙细胞要具有分泌多种抗体的能力   D.丙细胞的形成先通过筛选得到杂交瘤细胞，再进行抗体检验

下列关于微生物分离和培养的叙述,正确的是 ( )

下图表示细胞融合技术的一些过程。阅读下列材料，并简要回答下列问题。

(注“十”代表有抗性，“-”代表无抗性）

材料一:近年来，细胞工程已进人高速发展阶段，已经成为生物学领域中一颗耀眼的明星。该工程可在细胞水平或细胞器水平上，按照人们的意愿获得新型生物或特种细胞产品。

材料二：微生物采油的关键技术是获得性能优异的菌种，应用原生质体融合技术将两种微生物进行融合，构建耐中高温采油微生物引起了科学家的广泛关注。宋绍富等人选用细菌I和细菌JD先后进行了各自抗生素抗性以及融合实验的相关研究。研究发现，I菌与JD菌对不同抗生素的抗性是不同的，测量结果见上表。

（1）上图中，若A细胞和B细胞均为植物细胞，细胞融合完成的标志是____________ ；形成的D细胞还要应用植物组织培养技术将其培养成植株。

（2）上图中，若A细胞和B细胞均为动物细胞，与植物细胞融合相比，从A细胞和B细胞到C细胞的过程中，______________是诱导动物细胞融合特有的诱导因素，该过程说明了细胞膜具有_______________。

（3）利用I菌和JD菌进行细胞融合时，首先应使用 _______________法去除菌体的细胞壁，将获取的______________保存在等渗溶液中待用。

（4）在对I菌和JD菌融合后的融合子进行筛选时，比较理想的是在培养基中添加3μg/ml红霉素（或3μg/ml利福平）与_______________两种抗生素,此种培养基称为_____________。             

现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，你认为它们适于分离（注：固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌）

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离这种酵母菌。操作如下：

(1)制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是______________________________________。获得纯净培养物的关键是____________________。

(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是__________________________。划线的某个平板经培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是______________________________。

(3)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一________的固体培养基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌__________。实验中所用培养基按功能属于__________培养基。

(4)若要检测土样中的酵母菌含量，应采用__________________法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是______________________________。然后，将1 mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，各在3个平板上分别接入每种稀释度的稀释液0.1 mL，经适当培养后，6个平板上的菌落个数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为____________个。

土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应。科研人员进行如下实验：

实验原理：

固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如图），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。

实验步骤：

步骤1  取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀释液1mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h。

步骤2 在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种,培养3～4d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如表）。

分析回答：

（1）从物理形态看，培养基A属于_______培养基。培养基中磷源应该是______________。

（2）步骤1中接种方法是__________________，步骤2中接种环的灭菌方法是________。

（3）根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是_____________。

（4）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基B中，并在37℃、200 r·min^-1 摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到下图所示曲线。

①用摇床进行培养的好处是___________________________________________。

②结果表明最优良的解磷菌株是_______________。

I.现有五种不同的抗生素（甲、乙、丙、丁、戊），要测它们对金黄色葡萄球菌的作用效果。图1表示在均匀接种了金黄色葡萄球菌的固体培养基上，分别于不同位置加入2mg不同的抗生素的实验结果（图中●为添加点）。图2表示这五种抗生素对成人产生毒副作用的剂量。请回答：

              图1                                                  图2

（1）由图1可知，_______种抗生素的抗菌效果最好。

（2）如果给予剂量为2mg，那么________种抗生素最适宜成人使用，理由是_____________。

（3）已知丁种抗生素作用的原理是抑制金黄色葡萄球菌细胞壁的形成，由此推测该种抗生素对成人的毒副作用较小的可能原因之一是___________________________。

（4）为保证培养基上能均匀地生长出一层金黄色葡萄球菌，将菌液接种到固体培养基上时宜进行____________（填“涂布平板”或“平板划线”）操作。实验过程中，与用于计数的平板接种不同的是本实验要保证滴加到培养基上的菌液_______________，以缩短培养时间。

（5）本实验过程中所使用的无菌技术，除用来防止培养物（金黄色葡萄球菌）被其他外来微生物污染外，还能_______________。

                                            图1

（1）如图1所示，将牛胎儿成纤维细胞核移入去核卵母细胞中，该技术称为_________技术；供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代以内的细胞，其原因是_________________________。

（2）胚胎移植时，为使代孕母牛能处于适合的生理状态，需要用激素对其进行_______处理。

（3）采用SRY-PCR法进行性别鉴定的基本程序是提取牛胎儿成纤维细胞的DNA，经PCR反应体系扩增SRY基因（Y染色体上特有的性别决定基因）片段，然后用SRY特异性探针对扩增产物进行检测。

①PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物以外，还应含有____________；其中，dNTP的作用是____________________________________，引物应选用图2中的________（填图中标号，图2中I、II、III、IV是引物，箭头是延伸方向）。

                              图2

②若扩增产物含大量SRY基因片段，则该种牛胎儿成纤维细胞______（填“能”或“不能”）用作图1所示技术流程中转化过程的受体细胞。