BAK基因是近年来发现的一种促凋亡基因，癌细胞内的BAK基因表达异常。将体外扩增的BAK基因导入癌细胞，有望成为癌症治疗的新途径。请分析回答：

(1)正常细胞生命历程包括________等过程，细胞凋亡是由________所决定的细胞自动结束生命的过程。

(2)癌变是在致癌因子的作用下，细胞内的________发生了突变而导致的。在癌变细胞内，BAK基因的表达水平明显________。

(3)实验小组为验证导入BAK基因在胃癌细胞中大量表达对胃癌细胞产生的影响，进行如下操作，并得到如图的结果，请补充完整实验步骤。

①用胰蛋白酶处理胃癌组织使之分散成单个细胞；

②将分散的单个细胞，等量分为甲、乙、丙三组，甲组细胞________，向乙组细胞中导入不携带BAK基因的载体，向丙组细胞导入________；

③在相同且适宜的条件下培养5d，统计各组活细胞数，并从分子水平上比较BAK蛋白的含量。

实验结果：丙组细胞数明显少于甲组和乙组，原因是________。

细胞周期失控是癌症的一个标志性特征，细胞周期素依赖性激酶(CDK)4和6是细胞周期的关键调节因子，CDK4／6在许多细胞中均过度活跃，导致细胞增殖失控。在雌激素受体阳性乳腺癌中，CDK4／6的过度活跃也非常频繁。I brance是一种口服CDK4／6抑制剂。为了验证I brance对乳腺癌细胞体外生长的作用，请根据以下提供的实验材料，完善实验思路，并回答以下问题。

    说明：细胞的数量通过测定相应培养瓶的吸光度值表示，具体操作过程不做要求；细胞抑制率＝(1－实验组吸光度值／对照组吸光度值)；CDK4／6活性可用抗原抗体法进行检测，具体检测过程不做要求。

    材料和用具：细胞培养瓶、乳腺癌细胞(MCF－7)悬液、乳腺癌细胞培养液、MTT仪器(测定细胞培养液的吸光度)、不同浓度的I brance溶液(用生理盐水配制)、生理盐水、CDK4／6活性检测试剂

    (1)实验思路：

    实验结果：①实验组细胞的抑制率高于对照组，在三组实验组中，I brance浓度越高抑制率越大。

    ②CDK4／6活性在对照组中最高，在三组实验组中，I brance浓度越高CDK4／6活性越低。

    (2)根据(1)中的思路和结果，设计一张表格用以记录实验结果。

    (3)研究发现实验组处于细胞周期S期细胞的比例均显著减小，且随着药物剂量增加，S期细胞的比例减少，由此推测CDK4／6在细胞周期中的作用机理是________________。虽然药物I brance抑制乳腺癌细胞的生长十分有效，但在后期的临床研究中，发现其也可引起患者中性粒细胞数目显著下降，根据这一结果，推测其可能影响免疫系统的第________________(选填“一”“二”或“三”)道防线。

请回答与实验有关的问题：

   某同学从资料获知，二氯二乙胺能抑制癌细胞的增殖，并设计了如下实验加以验证，请根据实验方案回答问题。

   实验材料：二氯二乙胺溶液，蒸馏水，生理盐水，细胞培养液（内有小鼠肝部肿瘤细胞），试管等。

   实验的主要步骤如下表所示：

结论：第一，                                                ；

     第二，                                                。

①________________________________________________________________________________。

（3）设对照组癌细胞增殖率为100%，用下面公式计算各用药组癌细胞增殖率：

①将表中前48小时的数据转化为相应给药组细胞增殖率随时间变化的柱形图。

②通过数据和柱形图分析可以得出蜂毒素对人肝癌细胞的作用效果的特点是：______________________________________________________________________________．

（4）顺铂是一种DNA损伤药物，也是目前临床上多种癌症化疗的首选药物．若要探究蜂毒素联合顺铂对肝癌细胞生长的影响，应还需设置_____________ 给药组才能得出结论．

某同学从资料获知，二氯二乙胺能抑制癌细胞的增殖，并设计了如下实验加以验证，请根据实验方案回答问题。

［实验材料］已配制的不同浓度的二氯二乙胺溶液，蒸馏水，生理盐水，细胞培养液（内有小鼠肝部肿瘤细胞，并含有细胞所需的全部营养物质），试管等。

［实验的主要步骤］

Ⅴ.统计分析处理实验数据。

（2）进行实验，结果如下：

第一，________________________________________         

第二，____________________________________________

为研究药物二甲双胍、TRAIL在抗人膀胱癌中的作用，科研人员取适量人膀胱癌细胞进行了以下实验。

(1)细胞癌变后，细胞周期将变_____(填“长”或“短”)。

(2)研究表明：有氧情况下，癌细胞从内环境吸收并用于细胞呼吸的葡萄糖是正常细胞的若干倍，但产生的ATP总量无明显差异。这说明：

①癌细胞内的_______基因的结构发生了改变并被激活，进而改变了代谢途径。

②与正常细胞相比，癌细胞的______(填“有氧”或“无氧”)呼吸加强。

(3)若要单独研究二甲双胍的作用，应将人膀胱癌细胞随机分为两组，A组每天腹腔注射用生理盐水配制的二甲双胍溶液，B组注射______，连续给药48h，每隔2h记录癌细胞数量。

①由图分析，两种癌细胞中对TRAIL高度抵抗的是_________，判断依据是_________。

②实验结果表明，联合用药比单独用药对253J细胞的增殖_________。

③根据药物对两种癌细胞的不同作用效果，推测二甲双胍对TRAIL抗癌起辅助作用的前提是_________。

为提供治疗乳腺癌的新思路，科研人员检测到乳腺癌细胞内蛋白A的表达量高于癌旁组织。为了探讨蛋白A与乳腺癌细胞增殖的关系，请根据以下提供的实验材料及结果完善实验思路并分析。

实验材料：体外培养乳腺癌细胞株MCF﹣7悬液、动物细胞培养液、浓度为50mmol/L的X溶液（用B液体配置）、B液体等。（要求与说明：实验初始时等量细胞悬液中细胞数量相等，细胞培养条件适宜。实验仪器、试剂、用具操作不做要求。）

请回答：

（1）实验思路：

①取培养瓶若干随机均分为6组，编号为A、B、C、D、E、F

②用B液体将50mmol/L的X溶液进行稀释，得到浓度依次为40mmol/L、30mmol/L、20mmol/L、10mmol/L的X溶液。

③_____________________________________________________________________

④在相同适宜条件下培养一段时间后，分别测定并记录每只培养瓶细胞数、培养液中腺嘌呤剩余浓度，破碎细胞后，再测蛋白A浓度。

⑤对所得实验数据进行分析与处理

（2）分析与讨论：

本实验所得结果如图所示：

①据此结果推测：物质X与乳腺癌细胞增殖、蛋白A合成及腺嘌呤吸收量的关系为______

②基于以上实验及分析，请你提出一种治疗乳腺癌的新思路___________________________

③测定细胞数时，将细胞悬浮液加胰蛋白酶处理后，可使用______在显微镜高倍镜下镜检计数

骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一。科研人员研究曲古抑菌A（TSA）对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制，为临床治疗寻找新方向。实验过程如下：

步骤1 用含青霉素和链霉素的高糖培养基，在37℃、5% CO₂培养箱中培养人骨肉瘤细胞一段时间。

步骤2 取适宜浓度的处于生长旺盛期的人类骨肉瘤细胞，用加入不同浓度的TSA（0～200 ng·mL^-1）的培养基继续培养24h。

步骤3 对各组细胞进行抽样检测，检测方法是先用台盼蓝试剂（一种细胞活性染料）染色再用血细胞计数板计数，统计细胞存活率（未染色细胞数/细胞总数×100%），结果如图1。

步骤4 分别提取TSA浓度为0 ng·mL^-1、25 ng·mL^-1、50 ng·mL^-1处理的3组细胞，测量细胞中与凋亡相关的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌动蛋白基因（不同的组织细胞中表达相对恒定）表达的蛋白质量并计算比值，结果如图2。分析回答：

（1）与正常成骨细胞相比，骨肉瘤细胞容易在体内分散和转移，其主要原因是                            。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是                     ，细胞培养箱中保持5% CO₂的作用是                  。

（2）步骤2中，设置0 ng·mL^-1 TSA实验的主要目的是                         。

（3）用台盼蓝试剂检测细胞活性的主要原理是                                  。

（4）图1所示结果表明                                  。

（5）根据图2判断，骨肉瘤细胞中          基因过度表达会加速细胞凋亡。