[生物——选修1:生物技术实践]

手机高温、潮湿的环境非常适合细菌的生长，由大肠杆菌引起的食源性疾病日渐成为社会比较关注的公共卫生问题。为了了解手机上大肠杆菌的种类及分布情况，某兴趣小组进行了如下实验步骤。请进一步完善实验内容并回答相关问题：

（1）实验步骤：

①配制含有                   、水、无机盐的固体培养基，并在培养基中加入少量         （使大肠杆菌菌落呈现黑色）；

②从10名学生的手机正、反面采集样品，分别接种至灭菌的培养基上，在37°C恒温培养箱中培养24〜48h，选取        的菌落；

③将接种针用         法灭菌后，将②中选取的菌落接种到       （填“固体”或“液体”）培养基，在恒温摇床上培养24h，使细菌大量繁殖；

④用        法将③过程所获得的细菌接种到培养基上，培养分别统计菌落的种类和数目；

⑤根据菌落的特征进一步鉴定大肠杆菌的类型。

（2）上述实验步骤中，从用途看，①所用培养基属于          培养基。

（3）上述实验步骤④统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是           。

[生物——选修1：生物技术实践]

下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，据图回答：

（1）细菌培养基的成分一般都含有碳源、水、________、________四类，该实验所用的选择培养基只能以________作为唯一氮源，其原因是________。鉴别培养基还需添加________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。

（2）统计样品中活菌数目常用的方法是________：在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191，每毫升土壤样品溶液中的细菌数量为________×10⁸个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较________。

（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________（需答两条）。

［生物—选修1：生物技术实践］

下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关间题：

(1)该培养基只允许分解尿素的细菌生长，这种培养基称为　　　　培养基。该培养基会抑制其它种类微生物生长，其原因是该培养基　　　　。

(2)若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，上述培养基中还需要添加的成分是　　　　，接种时应采用　　　　法，该方法接种培养后的菌落，不可能是下图中的　　　　（单选）。

 (3)从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其作进一步的鉴定，可在上述培养基中加入　　　　指示剂，培养该菌后，如果指示剂变　　　　，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

 (4)某同学用0.1mL稀释液在稀释倍数为10⁶的平板中测得菌落数的平均值为163，则每mL样品中的细菌数是　　　　。

为研究“某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素耐药性情况”，

某同学进行了如下实验：

请分析回答下列问题：

(1)配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加如适量的________和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要进行的操作是________。

(2)接种微生物的方法有很多，图1中过程③所示的方法为________。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是________。用该方法统计样本菌落数后，

所得数据需要乘以10ⁿ后，才可表示乳酸菌的数量(单位：个／ml)，这里的n＝________。

(3)请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”的实验操作步骤：

步骤1：分别取________加入三组无菌培养皿中，再加入灭菌并冷却到________℃左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板。

步骤2：向三组培养基中分别接种待检测的乳酸菌菌种。

步骤3：将接种后的三组培养基和一个________都置于适宜温度等条件下培养一定时间，观察比较培养基中菌落生长情况。

(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为              。下面四种菌落分布图中，不可能由用该方法得到的是              。

(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？________。为什么？                                  。

(3)如分别取0.1 mL已稀释10³倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为________。

(4)大肠杆菌是自来水中常见的一种有害微生物，可以通过在稀释涂布平板中加入              指示剂，如果菌落呈       色，并带金属光泽，则说明自来水中含有大肠杆菌。