下列是与微生物培养有关的问题，请回答：

(1)某细菌固体培养基的组成成分是KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄，葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是__________，碳源是           ，氮源是         ；已知只有能分解尿素的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于       培养基。从同化作用类型看，用该培养基培养的细菌属于            。

(2)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入              ，细菌合成的       将尿素分解为氨，pH增高，使指示剂变红色。

(3)某同学在实验时得到了如图所示的结果，则尿素分解菌位于 (　 　)

A．③               B．①②           

C．②③             D．①②③

（1） 筛选微生物 L时，用            作为培养基中的唯一氮源，加入            凝固剂。接种时应采用           方法

（2） 下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是           灭菌

   A高压蒸汽     B 紫外灯照射      C 70%的酒精侵泡液      D过滤

（3）对微生物L进行扩大培养时宜采用            培养基，接种时采用           方法对接种环进行灭菌

（4）脲酶宜采用共价偶联法进行固定化，可通过检测固定化脲酶的           确定其应用价值。除此法外，酶的固定化方法还包括           及交联法等。

（二）下面是关于获得能产生人干扰素大肠杆菌的问题。请回答：

（5）用限制性核酸内切酶识别人干扰素基因和质粒中一段特定的          并切割，然后用           连接形成重组DNA。该质粒是一种含抗生素抗性基因的          核酸分子

 A.双链环状  B.单链环状  C.双链线状  D.单链线状

（6）将含有人干扰素基因的重组质粒导人到大肠杆菌，经含有           的培养基筛选等过程，最终获得能产生人干扰素的大肠杆菌。

23.如图表示月季的花药离体培养过程，请回答：

（1）选择花药时，一般要通过_________来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期，一般来说，在_________期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，通常选择_______________的花蕾，花药培养成功率最高。

（2）在花粉的培养基中要加入一定的植物激素，常用的植物激素有____________________。

（3）从植物产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过_______阶段发育而来。

（4）图中的B过程需要_____，因为愈伤组织形成幼小植物后，植物需要叶绿素进行光合作用。

（5）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_____________指示剂培养几种细菌后，指示剂变红就可以判断其中含有能够分解尿素的细菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入______________染料，培养几种细菌后，培养基中出现透明圈，就可以判断其中含有纤维素分解菌。

54.（每空2分，共16分）请分析回答下列问题：

(1)无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。常用的灭菌方法有____________灭菌、干热灭菌和________灭菌。

(2)稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是        (        )

①土壤取样  ②称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中制备土壤提取液 

③吸取0.1 mL溶液进行平板涂布  ④依次稀释至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵ 、10⁶、10⁷稀释度

A．①②③④         B．①③②④     C．①②④③         D．①④②③

(3)利用酵母菌将葡萄汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验，在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈______色。在发酵过程中，随着酒精度的提高，发酵液逐渐呈现深红色，原因是______________________．

(4)酵母菌适合生活在偏酸性环境，而放线菌则适合生活在偏碱性环境中，分离二者所用的培养基称为____________。

(5)在腐乳制作的过程中，起主要作用的微生物是____________。

(6)腐乳制作过程中影响其风味和品质的因素有哪些 (        )

①盐的用量  ②酒的种类和用量③发酵温度  ④发酵时间  ⑤香辛料的用量

A．①②③④⑤     B．①②③     C．①②⑤       D．③④

(1)②过程所使用的接种方法是________。用该接种方法对微生物进行计数时，通常选用菌落数在________个的平板进行计数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目________，原因是________。

(2)从用途上来说，1号培养基属于________培养基，制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→________→倒平板。

(3)该实验中酶活性鉴定是鉴定________酶的活性，可以加入________指示剂，如果指示剂变为________色，说明该酶的检测为阳性。

 尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，为探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如下表所示，实验步骤如图所示．

（1）培养基中加入尿素的目的是 ______ ，从物理形态看，培养基属于 ______ 培养基．“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的 ______ 和 ______ ，为了满足图示锥形瓶中目的菌对氧气的需求，应采用的操作方法是 _______________________________．
（2）图中将细菌（非硝化细菌）转到培养基上时，应采用 ______ 法接种，获得单个菌落．接种环的灭菌方法是 ______ ．初步筛选出来的菌种，还需要用生化的方法作进一步的鉴定：在此培养基中接种并培养初步筛选的菌种，若PH ______ （降低/不变/升高），说明该菌种能够分解尿素．
（3）A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．若造成A同学实验结果的原因是培养基被杂菌污染．为了确定该原因，操作思路是 _________ ．

(1)下表是某液体培养基成分含量表。

用此培养液若用来筛选自生固氮菌，则应除去的成分是表格中的       ；若要将该液体培养基配制为固体培养基，则还需加入的物质是        ，该物质在加热时应注意        。

(2)检验饮用水中大肠杆菌含量是有效监控疾病发生的必要措施。

①检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后采用        法将不同稀释度的水样接种到培养基的表面进行培养，记录菌落数量。下面4种菌落分布图中，不可能用该方法得到的是       。

②用该方法统计样本菌落数时需要设置对照组。设置方法是        。

③如分别取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到3个培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为45、56、67，则每升原水样中大肠杆菌数为        。

④已知大肠杆菌能发酵乳糖并产气。现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？        。

①按以下配方配制培养基：

②将培养基在121℃下高压蒸汽灭菌20min。

③倒平板，冷却备用。

④用稀释涂布平板法接种。 

⑤将平板倒置，与28℃下培养7天。 

据此回答问题：

（1）培养基中为链霉菌提供碳源的物质是            ，提供氮源的物质是            。培养基中的重铬酸钾能够减少细菌、真菌的数量，故该培养基属于        培养基。

（2）培养基pH的调节是在培养基灭菌            （填之前或之后）进行。

（3）在倒平板之前，应将培养基冷却至       ℃左右才能进行；冷却凝固的平板要倒过来放置，原因是                                    。

（4）从稀释倍数为10⁴的稀释液中取0.1mL，涂布一个平板，某同学共涂布了3个这样的平板，统计的菌落数分别是201个、212个和256个，那么每克样品中的菌株数是         个。

（5）下图所示的四种菌落分布图中，不可能由稀释涂布平板法得到的是__      _____。

(2）由霉菌发酵生产果胶酶是食品工业中使用量最大的酶制剂之一，果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括          、果胶分解酶、果胶酯酶等；在探究果胶酶的用量实验中，因变量是              。

(3)无菌技术是影响植物组织培养能否成功的重要因素。用       和质量分数为0．l%的氯化汞对外植体消毒，用        清洗，接种时每次使用器械后都需要        灭菌；接种3-4d后，观察外植体的生长情况，若发现外植体被污染，分析其原因可能是          。（至少答出两点）

(1)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂，细菌合成的________将尿素分解为________，pH升高，使指示剂变为红色。

(2)培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌， 这种培养基属于_____培养基。

(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的________和________，实验中需要振荡培养，原因是______________________。

(4)下图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

(5)关于下图的操作方法和结果，叙述正确的是    __。

A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌

B．划线操作须在火焰上进行

C．在5区域中才可以提到所需菌落

D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌