：

(1)本研究构建重组质粒时可选用四种限制酶，其识别序列如图所示。为防止酶切片段的自身连接，可选用的限制酶组合是________或________。

A．①②　　B．①③　　C．②④　　D．③④

(2)设置菌株Ⅰ为对照，是为了验证__________________不携带纤维素酶基因。

(3)纤维素酶基因的表达包括________和________过程。与菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有________________。

(4)在以纤维素为唯一碳源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株________不能存活，原因是____________________________________________________。

(5)在利用纤维素生产酒精时，菌株Ⅳ更具优势，因为导入的重组质粒含有__________，使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新而造成的酶的流失，提高酶的利用率。

下表为某微生物培养基的配方，请回答相关问题：

（1）配制培养基流程是_____________________________________并灭菌，常用的灭菌方法是______________。       

（2）根据培养基的成分判断，该培养基能否用于分离土壤中分解尿素的细菌？_______，原因是_________________________________。

（3）为检测尿素分解菌是否存在，在接种之前还应进行的操作是往培养基中加入_________，若有尿素分解菌的存在，则将会出现_____________。

（4）玉米是重要的粮食作物，是很好的生物学实验材料，在副食品生产上有广泛的应用，经深加工后可生产酒精、玉米胚芽油、葡萄糖等产品（流程如下）。请回答相关问题：

①玉米秸杆富含纤维素，水解用的纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即______________________________________。

②玉米胚芽油不易挥发，可选用萃取法提取，萃取的效率主要取决于____________________________。

③提高萃取效果的方法一般是_______________________________________________________________。

棉花、木材以及作物秸秆中富含纤维素，有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究，人们能够利用纤维素酶处理上述原料以获得高档服装面料。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。分析回答问题。

​

（1）具有纤维素酶是这些微生物能够分解纤维素的原因，一般认为纤维素酶至少包含_______________________________三种酶，其中_________酶能够将纤维二糖分解成葡萄糖。

（2）培养基中加入的化合物A是________，为微生物的生长提供_________，这种培养基从功能上看属于____培养基。

（3）在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用__________染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选。某同学在实验时得到了如图所示的结果，则纤维素分解菌位于_______内。

植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解，回答下列问题：

（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中葡萄糖苷酶可将______分解成_________。

（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成______色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心__________的。

（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养（成分见下表）：

据表判断，培养基甲__________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是__________；培养基乙________(填"能"或"不能")用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是____________。

    （1）自然界中①环节需要的微生物大多分布在____________的环境中。将从土壤中获得的微生物培养在以____________为碳源，并加入____________的培养基上筛选周围有____________的菌落。

    （2）在如上所述的筛选中获得了三个菌落，对它们分别培养，并完成环节②，且三种等量酶液中酶蛋白浓度相同，则你认为三种酶液的活性____________________（填“一定相同”“不一定相同”或“一定不同”）。

    （3）生产中可以满足④环节的常见菌种是___________________，为了确保获得产物乙醇，⑤环节要注意_______________________。

现在国家大力提倡无纸化办公,但是每年仍然不可避免地产生大量废纸,其主要成分是木质纤维,人类正努力将其转化为一种新的资源——乙醇。下图是工业上利用微生物分解纤维素生产乙醇的基本工艺流程,请回答相关问题:

（1）将从土壤中获得的微生物培养在以_____为唯一碳源的培养基上。纯化菌种时,为了得到单一菌落，常采用的接种方法有两种，即____和____。

（2）若①环节选择霉烂的木头,则②环节获得的酶中至少包括C₁酶、____和____三种组分，其中能够将纤维二糖分解为葡萄糖的是_________。

（3）在含纤维素的培养基中通常加入_______染料，此染料可与纤维素形成________色复合物。用含有此染料的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________。我们可以通过此方法来筛选纤维素分解菌。

（本题分两个部分，第Ⅰ部分7分，第Ⅱ部分6分，共13分）

Ⅰ：植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解，回答下列问题：

（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中葡萄糖苷酶可将_______________________。

（2）纤维素分解菌的筛选方法叫_________法。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的____________________。

（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养（成分见下表）：

据表判断，培养基甲_________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_____________________________________________。

(4）在用稀释涂布平板计数法对纤维素分解菌数目进行统计时，统计的菌落数往往比活菌的实际___________，原因是____________________。

Ⅱ、某市农科院课题研究小组对植物园的胡萝卜新种中的β—-胡萝卜素进行提取和鉴定，所用装置及所得的结果如下图。

实验流程为：新鲜胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素粗品→胡萝卜素粗品的鉴定。

（1）科学研究最近发现天然胡萝卜素具有使______________恢复成正常细胞的作用。

（2）影响萃取效率的主要因素是__________________________，实验流程中的萃取与浓缩所用的操作装置图分别为______________________。

（3）若粉粹后的胡萝卜干燥所采用的温度太高，干燥时间太长会导致_______________。

（4）②所指的四个色斑代表_______________，①③所指的四个色斑代表______________，结果表明β—-胡萝卜素提取是成功的。  

生产实践中应用的菌种主要来土壤,从土壤中分离微生物的一般实验流程是：土壤収样—选择培养—梯度稀释—鉴別培养。请回答：

（1）欲从土壤中分离纤维素分解菌，最好选择在      环境中采集土样，所选择的培养基应以       作为唯一碳源。

（2）Taq耐热菌的发现和分离为基因工程的发展作出了突出贡献。分离Taq耐热菌所需要的特殊培养条件是             ，在生物休内进行DNA复制所必需而PCR技术中不需要的酶是             。

（3）下图是纯化微生物培养的效果图。请冋答：

①先配制好的培养基在接种前都要进行             灭菌，在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在            条件下进行。

②获得图A效果的接种方法是            ,获得图B效果的接种方法是            。

办公和学习产生大量废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种薪的能源乙醇。下图是工业上利用微生物分解纤维素生产乙醇的基本工作流程，请回答相关问题：

（1）图中①环节所需的微生物若来自土壤，要统计土壤样品中该活菌的数目，宜采用________法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的________就能大约推测出样品中的活菌数。

（2）分解废纸中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将_______________分解成________。

（3）④接种的微生物是________，为降低乙醇生产成本，可利用________技术使酶能够重复使用。

（4）纸张加工过程中，有时要加入一些由植物芳香油制成的香精，芳香油的提取方法有________（请写出3种）等；也可以用植物色素使纸张着色，根据植物色素易溶于有机溶剂的特点，可以考虑使用________法提取植物色素。

(2)纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较________，而且菌种易________．常用的凝固剂是________．

(3)从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是________，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是________．

（二）人组织纤溶酶原擞活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

(1)卵母细胞可以从活体________中采集，还可从已处死的雌羊卵巢中获取．对供体母羊用________处理，可以获取更多的卵(母)细胞．采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力．

(2)欲用有限的早期胚胎获得多个转基用个体，可以利用________技术．由于代孕母羊对移入其子宫的外来胚胎________，才使早期胚胎能在代孕母羊体内存活．

(3)质粒上应有________，才能使htPA基因插入其中．在转htPA基因母羊的肌肉细胞中________(能、不能)检测到目的基因．若在其羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达．