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            • 1.

              了获得较多、较纯、较完整的甜菜总DNA,科研人员比较了A方法(通过CTAB裂解细胞,并与蛋白质形成复合物)、B方法(通过SDS裂解细胞释放核DNA,使蛋白质变性)、C方法(通过高盐沉淀蛋白质)从嫩叶、块根中提取总DNA的效果,主要实验步骤和相关检测结果如下,其中氯仿-异戊醇不溶于水且密度均大于水,DNA不溶于氯仿-异戊醇,蛋白质等溶于氯仿-异戊醇。分析回答:

              ①将液氮冷冻的组织研磨成粉末

                          ↓

              ②分别用A、B、C三种不同方法处理

                          ↓

              ③DNA粗提液在65℃水浴保温60min,搅拌均匀

                          ↓

              ④加氯仿-异戊醇,离心取____________?,加冷酒精,收集沉淀

                          ↓

              ⑤加入RNA酶,37℃水浴保温20min,重复步骤④

                          ↓

              ⑥将沉淀室温干燥后,溶于超纯水中,-20℃保存备用


              结果检测

              组织

              方法

              组别

              OD260/OD230

              OD260/OD280

              得率/μg·mg-1

              嫩叶

              A方法

              A1

              1.970

              1.821

              0.105

              B方法

              B1

              1.973

              1.719

              0.096

              C方法

              Cl

              1.647

              1.568

              0.082

              块根

              A方法

              A2

              1.888

              1.888

              0.029

              B方法

              B2

              1.811

              1.682

              0.030

              C方法

              C2

              1.376

              1.320

              0.020


              注:①纯净的DNA样品OD260/OD230值约为2.0,过低表明小分子物质残留较多;
              ②纯净的DNA样品OD260/OD280值约为1.8,若比值大于1.8表示存在RNA残留,若小于1.8表示存在蛋白质残留。

              ③得率是指每毫克组织所提取的DNA量。

              (1)本实验不选择哺乳动物血液为实验材料的原因是_________________________.

              (2)步骤③将DNA粗提液在65℃水浴保温60min的目的是_________________。步骤④“? ”表示__________________________。步骤⑤中加RNA酶的作用是_______________。

              (3)影响DNA纯度的物质主要有______________。提取的DNA中RNA残留较多的方法是______________。以嫩叶为材料提取DNA的得率较高,原因是______________。

            • 2.

              如图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。

              (1)图中实验材料A可以是________等,研磨前加入的B应该是________。

              (2)通过上述所示步骤得到滤液C后,再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是____________,再过滤得到滤液D,向滤液D中加入蒸馏水的目的是________。

              (3)在“DNA的粗提取与鉴定”实验中,将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2 mL的4种溶液中,经搅拌后过滤,获得如表所示的4种滤液,含DNA最少的是滤液________。

              1

              B液中

              搅拌研磨后过滤

              滤液E

              2

              2 mol/L的NaCl溶液中

              搅拌后过滤

              滤液F

              3

              0.14 mol/L的NaCl溶液中

              搅拌后过滤

              滤液G

              4

              冷却的95%的酒精溶液中

              搅拌后过滤

              滤液H

              (4)DNA鉴定的原理是___________________

              (5)下图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作步骤示意图,下列叙述正确的是________________


              A.图1、2中加入蒸馏水稀释的目的相同

              B.图1中完成过滤之后保留滤液

              C.图2中完成过滤之后弃去滤液

              D.在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质

            • 3.

              某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动,具体步骤如下:

              材料处理:称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份,每份10g。剪碎后分成两组,一组置于20℃、另一组置于-20℃条件下保存24h。

              DNA粗提取:

              第一步:将上述材料分别放入研钵中,各加入15mL研磨液,充分研磨。用两层纱布过滤,取滤液备用。

              第二步:先向6只小烧杯中分别注入10mL滤液,再加入20mL体积分数为95%的冷酒精溶液,然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌,使絮状物缠绕在玻璃棒上。

              第三步:取6支试管,分别加入等量的2mol/LNaCl溶液溶解上述絮状物。

              DNA检测:在上述试管中各加入4mL二苯胺试剂,混合均匀后,置于沸水中加热5min,待试管冷却后比较溶液的颜色深浅,结果如下表:

              材料保存温度

              花菜

              辣椒

              蒜黄

              20℃

              ++

              +++

              -20℃

              +++

              ++

              ++++

              (注:“+”越多表示蓝色越深)

              分析上述实验过程,回答下列问题:

              (1)该探究性实验课题名称是______________________________。

              (2)第一步中加入的研磨液成分中包括洗涤剂,其作用是____________,还包括NaCl,其作用是____________。

              (3)第二步中“缓缓地”搅拌,这是为了减少____________。

              (4)根据实验结果,得出结论并分析。

              ①结论1:与20℃相比,相同实验材料在-20℃条件下保存,DNA的提取量较多。

              结论2:________________________________________________。

              ②针对结论1,请提出合理的解释:_________________________。

              (5)氯仿密度大于水,能使蛋白质变性沉淀,与水和DNA均不相溶,且对DNA影响极小。为了进一步提高粗提取时DNA的纯度,依据氯仿的特性,在第三步的基础上继续操作的步骤是:___________________,然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。

              (6)为了检测提取的DNA,应选用的试剂是__________________。

            • 4.

              下图为利用鸡血细胞进行DNA粗提取和鉴定实验的部分操作示意图,请分析回答:


              (1)上述图示中,该实验的正确操作顺序是_____________________(用序号与箭头表示)

              (2)在提取过程中使用不同浓度的NaCl溶液的目的是____________________________。

              (3)步骤①的目的是析出并获得DNA,其依据原理是________________________。

              (4)DNA可用_________试剂鉴定,沸水浴后的颜色反应为___________。

              (5)实验室还可以利用香蕉等植物样品提取DNA,利用植物组织提取DNA时,须先破碎细胞,破碎细朐时需添加食盐和_________ 进行研磨,添加该物质的目的是_________,而加入食盐的目的是______________________。

            • 5.

              某实验小组以洋葱组织为实验材料,进行DNA粗提取和鉴定的实验,实验主要过程如下图,回答下列问题:


              (1)步骤一中需加入一定量的洗涤剂和    对洋葱组织进行处理,加入前者是的目的是               ,加入后者的目的是            。将搅拌和研磨后的物质进行过滤,即可得到含有DNA的滤液。

              (2)步骤二是DNA纯化过程中的关键步骤,可以采用以下几种不同的方法:

              ①滤液中NaCl浓度在      mol/L时可分离出DNA,若要再次提纯,需要将其溶解在2mol/L的NaCl溶液中;

              ②通常会向DNA粗提取物中加入嫩肉粉,其目的是         

              (3)步骤三中向滤液中加入DNA体积分数为95%的酒精的目的是___     _,得到纯净的DNA后,可利用DNA与            在沸水浴条件下会被染成    色,来对其进行鉴定。

              (4)提取出的DNA继续进行PCR,一般经过    次循环,每次循环经过                        三步。

            • 6.

              下图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作:

              (1)图中实验过程中,研磨前加入的B应该是______________。

              (2)通过上述所示步骤得到滤液C后,再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是______________,再过滤得到滤液D,向滤液D中加入蒸馏水的目的是______________。

              (3)在“DNA的粗提取与鉴定”实验中,将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2 mL的4种溶液中,经搅拌后过滤,获得下表所示的4种滤液,含DNA最少的是滤液________。

              (4)析出DNA过程中,加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓的目的是______________。

            • 7. 图为鸡血细胞中DNA的粗提取和鉴定实验过程中的部分操作示意图,请据图分析,回答下列问题:

              (1)图中正确的实验操作顺序是                      (用序号与箭头表示)。

              (2)步骤③中加入蒸馏水的目的是                             ;步骤⑤中加入蒸馏水的目的是                         

              (3)步骤①中所用酒精最好是经过       后再使用,该步骤的目的是_________________________

              (4)DNA可用               试剂鉴定,沸水浴后的颜色为             

              (5)由于鸡血较难找到,某学生试图用猪血代替,结果没有成功,其原因最可能是                              

            • 8.

              下列是关于生物技术实践方面的实际问题:

              (一)鸭梨醋饮属绿色健康饮品,既保存了鸭梨中的多种氨基酸、维生素、矿物质、有机酸等营养成分又兼具果醋醒酒护肝、助消化、降低血脂、软化血管等养生保健功能,深受广大消费者青睐。下图为鸭梨醋饮的制作流程简图,请据图回答问题。

              (1)为了提高该微生物的利用率,最好用       法对其进行固定。固定后应在固定溶液中浸泡一段时间,然后       ,转移至鸭梨汁中发酵。

              (2)过程②需要控制的条件      (至少列举两点)。过程②所用微生物与过程①所用的微生物结构上最显著的区别是        

              (3)若利用新鲜的鸭梨获取DNA,应事先去皮剪成小块,后添加      ,进行搅拌和研磨,再过滤收集滤液。

              (二)日常生活中使用的加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。

              (4)由下图推知,该实验的目的是      ,50℃时加酶洗衣粉中碱性蛋白酶的最适含量是        

              (5)下表是添加脂肪酶的加酶洗衣粉和普通洗衣粉洗涤效果的实验记录,请据表回答问题:

              若实验组1号洗净所需时间接近7 min,最可能的原因是       

              (6)根据以上实验结果,写出两项提高加酶洗衣粉洗涤效果的措施:       

            • 9.

              如图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。


              (1)图中实验材料A可以是洋葱(菜花等) 等,研磨前加入的B应该是________和       。作用分别是                        

              (2)通过上述所示步骤得到滤液C后,再向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是________________,再过滤得到滤液D,向滤液D中加入蒸馏水的目的是____________________。

              (3)在“DNA的粗提取与鉴定”实验中,将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2 mL的4种溶液中,经搅拌后过滤,获得如表所示的4种滤液,含DNA最少的是滤液________。

              (4)下面是某同学设计的DNA鉴定实验的主要步骤:

              ①取1支20mL试管,向其中先后加入2mol·L-1的NaCl溶液5mL和少量絮状DNA沉淀,用玻棒搅拌使其溶解。

              ②向试管中加入4mL二苯胺试剂,混匀后将试管置于50~60 ℃水浴中加热5 min,待试管冷却后,观察溶液是否变蓝。

              请指出上面实验步骤中的两个错误:________________、________________。

            • 10.

              某生物兴趣小组在学习了DNA的粗提取和鉴定实验后,尝试开展RNA的粗提取和鉴定实验。通过查阅资料,制订了以下的实验方案:

              【实验课题】酵母RNA的提取和鉴定

              【实验目的】1.从酵母中提取RNA;2.鉴定RNA。

              【实验原理】微生物是工业上大量生产RNA的原料,其中以酵母尤为理想,因为酵母核酸中主要是RNA,DNA很少,菌体易收集,RNA易分离。RNA不溶于乙醇和无水乙醚。利用稀碱法(稀碱能使细胞壁溶解)或高盐法(高浓度的盐改变细胞膜的通透性)来释放RNA。RNA水解液(加硫酸、加热)+苔黑酚-FeCl3试剂加热直到沸腾1分钟,会呈现墨绿色。

              【实验材料】干酵母粉、离心机、烧杯、试管、玻璃棒等;0.2%氢氧化钠、95%乙醇、无水乙醚、乙酸、10%硫酸溶液、苔黑酚-FeCl3试剂等。

              【实验步骤】

              ①称6克干酵母

              ②加0.2%氢氧化钠45mL,沸水加热20分钟,搅拌,后加乙酸7滴

              ③离心10分钟后取上清液

              ④边搅拌边缓慢加95%乙醇并静置10分钟

              ⑤离心后先用95%乙醇洗两次,再用无水乙醚洗两次

              ⑥获得RNA粗制品

              ⑦RNA鉴定

              请根据实验方案,思考并回答下列问题:

              (1)酵母菌细胞中含有RNA的结构有细胞核、                   。酵母菌也是便于用来研究细胞呼吸不同方式的好材料,理由是             

              (2)实验步骤⑤中,离心后取     用乙醇、无水乙醚进行洗涤。

              (3)RNA提取过程要注意温度的控制,在20~70℃的温度范围内停留的时间不能太长,其原因是     

              (4)稀碱法提取RNA须在沸水浴中进行的目的,一是     ,二是     ,以便获得更多更纯净的RNA。

              (5)若用花椰菜来提取DNA,可用       瓦解细胞膜,然后充分研磨,实验中研磨速度要     

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