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            • 1.

              回答下列问题:

              (1)博耶( H. Boyer)和科恩(S. Coben)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达,该研究除证明了质粒可以作为载体外,还证明了_____(答出两点即可)。

              (2)体外重组的质粒可通过Ca2+参与的_______方法导入大肠杆菌细胞:而体外重组的噬菌体DNA通常需与_______组装成完整噬菌体后,才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞,在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中,可作为重组噬菌体宿主细胞的是__________。

              (3)真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时,表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解,在实验中应选用________的大肠杆菌作为受体细胞,在蛋白质纯化的过程中应添加______的抑制剂。

            • 2. 埃博拉病毒(EBO)呈纤维状,EBO衣壳外有包膜,包膜上有5种蛋白棘突(VP系列蛋白和GP蛋白),其中GP蛋白最为关键,能被宿主细胞强烈识别.请回答下列问题:
              (1)基因疫苗指的是DNA疫苗,要获得编码GP蛋白抗原的基因疫苗,首先要提取出病原体的RNA,并将RNA ______ 要大量获得表达特异抗原的基因,可采用PCR技术进行扩增.
              (2)以GP蛋白作为疫苗比基因疫苗更安全,其原因是GP蛋白自身没有感染能力,但保留有 ______ .为了从牛分泌的乳汁中生产GP蛋白,在基因导入牛受体细胞前,基因的首段必须含有使其仅能在牛的乳腺细胞中特异性表达的 ______ ,才能驱动转录过程.这种通过分泌乳汁来生产所需要的药品的转基因动物称为 ______
              (3)为了提高胚胎的利用率,可采用胚胎分割技术.进行胚胎分割时,应选择发育良好、形态正常的囊胚或 ______ 进行操作.在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将 ______ .转基因牛是否培育成功,可以通过 ______ 技术从分子水平进行检测.
              (4)科研人员利用经EBO免疫后小鼠的 ______ 与鼠的瘤细胞进行融合成杂交瘤细胞,培养后可以获得纯净的单一品种抗体,其特点是 ______ ,可以用此抗体与药物制成“生物导弹”,抗击EBO.
            • 3.
              如图表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图右表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG.

              (1)图左DNA分子中的一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间由 ______ (化学键)连接.
              (2)若用限制酶SmaI完全切割图中含有目的基因D的DNA片段,其产物长度分为 ______ .
              (3)为了提高试验成功率,需要通过 ______ 技术扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝.在目的基因进行扩增时,加入的引物有A、B两种,引物的作用是 ______ ,若该目的基因扩增n代,则其中含有A、B引物的DNA分子有 ______ 个.
              (4)若将图右中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是 ______ .经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达,其最有可能的原因是 ______ .
              (5)导入目的基因的植物细胞,经过植物组织培养技术得到幼苗,该技术利用的原理是 ______ .
            • 4.
              如图1为某种常用质粒的序列图,Lac Z基因编码的酶能使无色的X-gal变为蓝色,Ampr为氨苄青霉素抗性基因.图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列.请回答下列问题:

              (1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒,培养基中应加入的物质有 ______ ,构建重组质粒时需要的工具酶有 ______ ,对获取的目的基因可用PCR技术对其扩增.
              (2)实验小组用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒,构建重组质粒后导入大肠杆菌中,在筛选重组质粒的培养基上,若大肠杆菌菌落显蓝色,说明导入了 ______ .没有导入任何外源DNA的大肠杆菌 ______ (填“能”或“不能”)在该培养基上生存.
              (3)若质粒和目的基因用BamH I和Bgl II两种限制酶切割后,用DNA连接酶相连,然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒,可获得长度不同的 ______ 种DNA片段.
            • 5. 请回答胚胎工程和基因工程方面的问题: 


              (1)应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、                                     以及在母体中发育和产出等过程。
              (2)在“试管牛”的培育过程中,要使精子和卵母细胞在体外成功结合,需要对精子进行处理,使其            。另外,培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期,该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和              
              (3)利用基因工程可以获得转基因牛,从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是               、基因表达 载体的构建、                                        。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素,则所构建的基因表达载体必须包括:某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、                                     和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是              (显微注射法、农杆菌转化法),为 获得能大量产生人干扰素的转基因牛,该基因表达载体应导入的受体细胞是           (受精卵、乳腺细胞)。

            • 6.

              I:下列是与芳香油提取相关的问题,请回答:

              (1)玫瑰精油适合用_________________法提取,其理由是玫瑰精油_________________________。蒸馏时收集的蒸馏液__________ (是、不是)纯的玫瑰精油。

              (2)蒸馏瓶中的水和原料量比例为_________,蒸馏过程中,影响精油提取量的主要因素有_________________和____________________。

              (3)如果蒸馏过程中不进行冷却,则精油提取量会__________,原因是_____________________。


              II:Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图:


              (1)步骤①中所选的卵母细胞应处于______________期。

              (2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其______________分离出ES细胞,ES细胞在形态上表现为____________________的特点。

              (3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的____________________。可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成____________________,利用______________技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有_______________________酶的酶切位点。

              (4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质,用抗Rag2蛋白的抗体进行________________________________。

            • 7.

              下图表示科学家采用不同方法培育良种牛的过程,a~h为操作过程,请据图回答有关问题:

              (1)“试管牛”技术的操作流程是       (填字母)。

              (2)d操作的名称是        ,受体子宫内胚胎发育的过程中,细胞不断分裂,其分裂方式为       

              (3)图中所示的过程中用到的激素是        ,其目的是获得更多的卵母细胞,经受精后可得到早期胚胎;图中早期胚胎属于胚胎发育的    阶段,其中胚胎干细胞来源于    (填数字标号)。

              (4)过程h常用的方法是        。为了能确定目的基因已经导入到受精卵中,相应的载体需要有        以便于进行检测。

            • 8. Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:

              (1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 ______ (结构).
              (2)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体.可以根据Rag2基因的 ______ 设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段.用Hind III和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 ______ 酶的酶切位点.
              (3)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ______ ,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验.
            • 9. (11分)(1)图甲是基因表达载体的模式图,图中抗生素抗性基因作为基因工程中的___________________基因。


              (2)模型是人们为了某种特定目的对认识的对象所做的一种简化的概括性描述,模型构建是生物学教学、研究和学习的一种重要方法。图乙是基因工程的操作流程图,图中D表示_____________。若图乙表示单克隆抗体制备过程,则从A、B到C的过程需要的生物方法是使用___________________。

              (3)有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体,试用相关的图示及文字(括号中填文字)完善图丙表示该过程:

              (4)高等哺乳动物受精后不久,受精卵开始进行细胞分裂。经桑椹胚、囊胚、原肠胚和组织器官的分化,最后发育成一个完整的幼体,完成胚胎发育的全过程。图中②、③依次为_________,胚胎从①中伸展出来的过程叫做____________。若要对图所示胚胎进行胚胎分割,则正确的操作方法的是图中的_________。

            • 10. Ⅰ.请回答下列有关生物工程的问题:
              (1)在转基因鼠的培育过程中,目的基因导入鼠受精卵的常用方法是 ______ .为鉴定外源目的基因是否转录,取转基因幼鼠相关细胞的RNA,与标记的 ______ 探针进行分子杂交.
              (2)植物体细胞杂交技术中,促进细胞融合的物理方法是 ______ ______ 或电激,杂种细胞形成的标志是 ______ ,杂种细胞用 ______ 技术培养成植株.
              (3)在试管牛的培育过程中,要使精子和卵母细胞在体外成功结合,需要对精子进行 ______ 处理.若需获取更多的卵细胞一般要对雌性个体注射 ______ ,使其超数排卵.防止多精入卵的两道屏障依次为 ______ ______
              Ⅱ.实施西部大开发,要切实保护好生态环境,大力开展植树种草,治理水土流失,防治沙漠化等.
              (1)从生态学的角度看,保护环境、保护生态系统稳定性的关键是保护 ______
              (2)从能量流动的角度看,在农田管理措施中,赚草抬虫的目的是 ______ .为生产无污染的食品,治虫措施中不宜大量喷施化学杀虫剂,替代使用化学杀虫剂的方法,一是 ______ ,二是 ______ .采用基因工程的手段,将 ______ 转入农作物中,形成具有抗虫性的新品种.
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