基因工程是在现代生物学、化学和工程学基础上建立和发展起来的，并有赖于微生物学理论和技术的发展，现在基因工程在动植物育种上有广泛而重要的应用。基因工程基本操作流程如下图，请据图分析回答：

（1）图中A最常用的是________。在基因工程中，第②步需要在________的催化作用下才能完成拼接过程。如果利用PCR技术扩增目的基因，需要加入的酶是________。

（2）研究中发现，番茄体内的蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，导致害虫无法消化食物而被杀死，人们成功地将番茄的蛋白酶抑制剂基因导人玉米体内，玉米获得了与番茄相似的抗虫性状，玉米这种变异的来源是________。

（3）科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，需要将该基因导入金茶花叶片细胞的染色体DNA上，培育出抗病的金茶花植株。在此基因工程操作过程中，如果需要检测目的基因是否在受体细胞中转录出相应的mRNA，需要利用________技术。如果需要

在个体生物学水平上检测该植物是否具备抗病性，需要做________实验。

（4）利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系有关细胞器功能的知识，请回答为什么不能利用大肠杆菌生产人的糖蛋白?

[生物—选修3：现代生物科技专题]

下图是转基因猕猴培育过程示意图，请据图回答：

（1）获取绿色荧光蛋白基因的方法包括________、利用PCR技术扩增目的基因和用化学方法直接人工合成等。基因工程的核心步骤是________（用图中数字表示），②过程常用的方法是________。

（2）PCR技术扩增目的基因的原理为________。扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，根据这一序列设计并合成________。

（3）图中过程⑦称为________，所用的早期胚胎通常是发育至________期的胚胎，受体雌猴对移入子宫的外来胚胎不会发生________反应，这为胚胎在受体雌猴内的存活提供了可能。

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是___________________，需要的条件有___________________________________________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的       _。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因________________________________________________________________________，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_______________________________识别结合位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取________________________________________技术。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

下图为基因工程获得转基因抗虫棉的过程。据图回答下列问题：

(1)图中①②所示的PCR技术是       反应的缩写，其原理是       。

（2）过程①中，加热至94℃的目的是       。过程②中，引物与单链相应互补序列结合，然后在       酶的作用下进行延伸，如此重复循环多次，使目的基因的数量以       形式扩增。

（3）过程③常用农杆菌转化法，农杆菌中Ti质粒上的       可转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体DNA上。要检测目的基因是否转录出了mRNA分子，可采用       技术。

大豆DNA的提取和纯化→扩增靶基因(CP4基因)→结果观察与鉴定

Ⅰ、

（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即______和从_______中获取。

（2）利用某植物的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是cDNA文库中只含有叶细

胞            的基因，而基因组文库中含有该植物的         基因。

（3）将目的基因通过基因枪法导入植物细胞时，常用的携带目的基因的金属颗粒有_____和______颗粒。

Ⅱ、在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，有同学按书本知识和自己的思路，试做了如下实验，请你判断实验结果。 

（1）他把与柠檬酸钠混合的新鲜血液放在几层纱布上过滤，纱布上最主要的结构是_________。 

（2）他在含有DNA、RNA及蛋白质等的混合物中加入大量的物质的量浓度为2.0 mol/L的氯化钠溶液后，通过搅拌后，放在几层纱布上过滤，他得到的滤液中一定含有实验目的中需要提取的成分是_________。 

（3）他在上述滤液中加入冷酒精（体积分数为95%），并用玻璃棒向一个方向搅拌，溶液中的丝状物的主要成分是_________。 

（4）他把含有DNA、RNA、蛋白质与氯化钠的混合溶液稀释成物质的量浓度为0.14 mol/L的氯化钠溶液后，放在几层纱布上过滤，他得到的滤液中含量最多的成分是______。