Ⅰ.下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必需组成。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点  的距离，单位为kb（1kb = 1000个碱基对长度）。请回答下列问题：

（2）该基因来自__________________（填“基因组文库”或“cDNA文库”）。

（3）翻译时与密码子发生碱基互补配对的是__________上的反密码子。

2017年8月2日，中华人民共和国农业部官网发布《2017年农业转基因生物安全证书（进口）批准清单》包含耐除草剂大豆MON87705、耐除草剂油菜T45、耐除草剂玉米T25等10多个转基因生物系列，回答下列问题：

（1）耐除草剂玉米T25植株的培育用到了基因工程技术，该过程以耐除草剂基因作为_________(填“目的基因”或“标记基因”）。

（2）如果将耐除草剂基因插入到Ti质粒的________上，通过农杆菌的转化作用，可使该基因转移进入玉米细胞，并将其插入到玉米细胞中染色体的DNA上，这种将耐除草剂基因导入玉米细胞的方法叫做_____。

（3）基因表达载体构建时，需用到__________酶将耐除草剂基因和Ti质粒结合在一起，在基因表达载体中位于耐除草剂基因的首端和尾端分别具有_________和_________(填结构名称)，以启动和停止基因的转录。

（4）在耐除草剂玉米T25植株的培育过程中__________(填“能”或“不能”）用动物病毒作为耐除草剂基因导入玉米细胞的载体，原因是__________________。

预防乙肝最有效的途径是接种疫苗。将乙肝表面抗原基因转移到植物细胞内可生产乙肝疫苗。回答下列问题。

    (1)欲在短时间内大量扩增乙肝表面抗原基因，可利用___________________(填写中文名称)技术，其原理是______________。利用该技术扩增乙肝表面抗原基因的前提是______________。

    (2)将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，此外采用________________法十分简便经济。用抗原一抗体杂交技术检测植物细胞是否成功合成乙肝表面抗原蛋白。若有__________出现，表明目的基因已控制合成蛋白质产品。

    (3)将乙肝表面抗原基因导入植物细胞后，采用______________技术获得愈伤组织，该技术需在_____________条件下进行。

    (4)乙肝疫苗在2～8℃条件下保存，其不宜在常温下保存最可能的原因是_____________________。

(1) 苏云金芽孢杆菌产生的毒蛋白,能有效杀死害虫。已知该基因的全部序列,科研人员可通过____法和PCR技术获得大量毒蛋白基因片段。据图分析,将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒1的过程需要用到的工具酶是____________。 

​ABCD

(3) 将重组质粒2与感受态的白僵菌菌液混合进行转化,重组质粒2在白僵菌细胞内被修复。一段时间后用含有____的平板培养基进行筛选,获得含有Bar基因的重组白僵菌。 

(4) 提取上述重组白僵菌全部mRNA,加入____酶,获得cDNA,再加入毒蛋白基因引物进行PCR反应,根据是否有相应产物生成判断毒蛋白基因在白僵菌体内是否完成____。 

(5) 科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上,以此饲喂饥饿处理的害虫,记录单位时间内的______,以判断重组白僵菌的杀虫效果。 

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是___________________，需要的条件有___________________________________________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的________________。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因________________________________________________________________________，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_______________________________识别结合位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取________________________________________技术。

  (1)在培育转入甲型H1N1病毒抗体基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是_____________，②过程常用的方法是_____________。

  (2)转入甲型H1N1病毒抗体基因的牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N1病毒抗体，在基因表达中，甲型H1N1病毒抗体基因的首端必须含有________，它是________识别和结合的位点。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________技术，培养出多头相同的转基因牛。

  (3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是________细胞，Ⅱ代表的细胞具有________________________________________的特点。

  (4)制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术。与动物细胞融合过程不同，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用________________对细胞进行处理。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA，PCR技术（图示）可以使样品DNA扩增，在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。基因工程也常用该技术扩增目的基因。

（1）进行DNA亲子鉴定时，首先需要用________将待测的样品DNA切成片段，然后用电泳的方法将这些片段分开，最后形成DNA指纹帮助确认身份。

（2）PCR技术的原理是________，甲过程所需要的条件是________，完成乙、丙过程需要反应体系提供________、________、________等物质。

（3）利用PCR技术扩增目的基因，要有一段________，以便合成a、b。若下图为第一轮循环产生的产物。请在下图e、f链上绘出以c链和d链为模板经PCR扩增的产物。

若继续循环，该DNA片段共经过________次循环后刚好能形成所需目的基因。该基因用于基因工程不能直接导入受体细胞，而是需要构建________，目的是________。