下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp为氨苄青霉素，抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：

（1）若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有_________________和_________________，构建重组质粒时需要的工具酶有___________________________，对获取的目的基因可用_________________技术对其扩增。

（2）实验小组用BamH I和Blg II两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了______________________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌______________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。

（3）将若干个质粒和目的基因用BamH I和Blg II两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为____________kb（已知目的基因的长度大于1kb，1kb=1000个碱基对）。

I.如表所示配方的培养基可筛选某种细菌，该细菌可以在该培养基上生长，进而形成菌落．回答下列问题：

（3）如果需要对该细菌进行计数，则应用______法接种．为了确定该细菌确实属于所要分离的细菌，需要在培养基中加入______指示剂。另一种接种细菌的常用方法是____________。该方法在操作时，每一次划线前都要进行灼烧，目的是________________________。

（1）转基因技术的核心步骤是______。为获得较多的目的基因可采用______技术进行扩增，该技术的原理是_______________。

（2）将植物体细胞用纤维素酶和果胶酶处理得到______，再将目的基因导入其中，最后通过______ 技术培养可得到相应的转基因幼苗。

（3）对大多数高等植物而言，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定，其遗传方式______  （填“遵循”或“不遵循”）孟德尔遗传定律，不会随______（填“花粉”或“卵细胞”）传给后代，从而保持了母本的遗传特性。

（4）来自原核生物中有重要价值的外源基因，无需改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，原因是 _________________。

编码蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。

回答下列问题：

现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。

①由图2可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是________________。

②仅根据图1、图2可知：上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少________________(填“A”“B”“C”“D”或“E”)片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。

(1) 上述过程涉及的现代生物工程技术中属于分子水平的技术是____________。 

(2) 图中B过程常用______法将绿色荧光蛋白基因导入成纤维细胞中。 

(3) C过程要获得单个的成纤维细胞进行培养,需用_______处理猪胚胎的部分组织;E过程中若要获得大量的卵母细胞,需用____处理成年母猪;在进行H过程之前,需要对代孕母猪进行____处理。 

(4) H过程前,若要进行胚胎分割,用分割针或分割刀片将胚胎切开,吸出其中的半个胚胎,注入预先准备好的____中,或直接将____移植入受体。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将内细胞团均等分割,否则会影响分割后胚胎的_______。 

干扰素是动物或人体细胞受病毒感染后产生的一类糖蛋白，具有抗病毒、抑制肿瘤及免疫调节等多种生物活性。回答下列问题：

(1)干扰素的作用机理是：干扰素作用于宿主细胞膜上的相应受体，激活细胞核中基因表达产生多种抗病毒蛋白，其中有些蛋白可通过激活____________使病毒的RNA水解；有些则可与__________(细胞器)结合，通过抑制病毒多肽链的合成发挥抗病毒作用。

(2)利用基因工程产生干扰素的方法之一：利用________酶将干扰素基因与牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件连接在一起构建基因表达载体，采用__________的方法导入牛的受精卵细胞中，经胚胎早期培养至________________期，移植入母体内发育成熟，即可获得能产生干扰素的转基因牛。

(3)由于干扰素在体外保存困难，可利用蛋白质工程对干扰素进行改造，基本途径是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的________→找到相对应的脱氧核苷酸序列。

干旱会影响农作物产量，科学家们对此进行了研究。如图为用探针检验某一抗旱植物基因型的原理，相关基因用R和r表示。据图回答下列问题：

(1)在利用PCR技术扩增R或r基因的过程中，利用________可寻找抗旱基因的位置并进行扩增。

(2)若被检植株发生A现象，不发生B、C现象，则被检植物的基因型为________。

(3)用从基因文库中获取目的基因的方法获取抗旱基因时需要用到限制酶，限制酶能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的____________断开。

(4)经检测，抗旱基因已经导入到烟草细胞，但未检测出抗旱基因转录出的mRNA，从构建基因表达载体的角度推测，最可能的原因是__________________

(5)要快速繁殖转基因抗旱烟草植株，目前常用的技术是____________，该技术的基本过程是：将离体的烟草细胞诱导脱分化形成____________，然后再分化出根和芽并发育成小植株。该技术在作物新品种的培育方面两个最主要的应用是：突变体的利用和____________。

近期《肝脏学》杂志发表了一篇文章称科学家经研究发现：乙肝病毒HBX蛋白质能调控宿主细胞内许多基因的转录，广泛影响宿主细胞的各种生命活动，包括调节细胞凋亡、抑制细胞DNA的修复、干扰细胞有丝分裂和细胞周期进程等，因此可利用该蛋白质治疗乙肝。下图表示利用乳腺反应器生产乙肝病毒HBX蛋白的流程示意图。请回答问题：

(1)已知HBX蛋白基因的核苷酸序列，则①可采用__________获得目的基因，并利用________技术进行扩增。

(2)为获得更高活性的HBX蛋白质，需要对蛋白质结构进行设计改造，但必须通过基因修饰或基因合成来完成，而不直接改造蛋白质的原因是_______________________________。

(3)图中⑥表示_________，在该步骤操作前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡，请你分析外源基因插入导致胚胎死亡的原因：_________________。

.线粒体是与细胞凋亡密切相关的细胞器．为研究蛋白B对家蚕细胞凋亡的影响，科研人员做了如下实验．
（1）细胞色素 c是线粒体内膜上的重要电子传递体，参与有氧呼吸第______阶段的生化反应．细胞受到凋亡信号的作用后，线粒体膜上的非特异性通道打开，引起线粒体膜的______性发生改变，线粒体膜两侧______的分布发生变化，导致线粒体膜电位下降或消失，使得细胞色素 c 释放出来，引发细胞凋亡．
（2）用生物碱H处理悬浮培养的家蚕细胞，处理不同时间后，用凝胶电泳方法测定细胞溶胶（细胞质基质）中细胞色素 c的含量，结果如图所示．


①由于细胞中微管蛋白的表达量______，在实验中可作为标准物质，以校准和消除由于细胞培养操作、细胞取样量和细胞色素 c的______等无关变量对实验结果的影响．
②据图分析，正常细胞的细胞溶胶中______检测到细胞色素 c，由______判断，随着生物碱H 处理时间延长，细胞色素 c逐渐释放到细胞溶胶中．
（3）为研究蛋白B的功能，科研人员构建蛋白B基因过量表达载体和蛋白B基因表达干扰载体，导人悬浮培养的家蚕细胞中，用______处理转基因家蚕细胞，检测到过量表达蛋白B的细胞溶胶中细胞色素 c的释放量减少，抑制蛋白B基因表达的细胞溶胶中细胞色素 c的释放量显著增加，推测蛋白B ______．

多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三 十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中正确的是