2017年8月2日，中华人民共和国农业部官网发布《2017年农业转基因生物安全证书（进口）批准清单》包含耐除草剂大豆MON87705、耐除草剂油菜T45、耐除草剂玉米T25等10多个转基因生物系列，回答下列问题：

（1）耐除草剂玉米T25植株的培育用到了基因工程技术，该过程以耐除草剂基因作为_________(填“目的基因”或“标记基因”）。

（2）如果将耐除草剂基因插入到Ti质粒的________上，通过农杆菌的转化作用，可使该基因转移进入玉米细胞，并将其插入到玉米细胞中染色体的DNA上，这种将耐除草剂基因导入玉米细胞的方法叫做_____。

（3）基因表达载体构建时，需用到__________酶将耐除草剂基因和Ti质粒结合在一起，在基因表达载体中位于耐除草剂基因的首端和尾端分别具有_________和_________(填结构名称)，以启动和停止基因的转录。

（4）在耐除草剂玉米T25植株的培育过程中__________(填“能”或“不能”）用动物病毒作为耐除草剂基因导入玉米细胞的载体，原因是__________________。

预防乙肝最有效的途径是接种疫苗。将乙肝表面抗原基因转移到植物细胞内可生产乙肝疫苗。回答下列问题。

    (1)欲在短时间内大量扩增乙肝表面抗原基因，可利用___________________(填写中文名称)技术，其原理是______________。利用该技术扩增乙肝表面抗原基因的前提是______________。

    (2)将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，此外采用________________法十分简便经济。用抗原一抗体杂交技术检测植物细胞是否成功合成乙肝表面抗原蛋白。若有__________出现，表明目的基因已控制合成蛋白质产品。

    (3)将乙肝表面抗原基因导入植物细胞后，采用______________技术获得愈伤组织，该技术需在_____________条件下进行。

    (4)乙肝疫苗在2～8℃条件下保存，其不宜在常温下保存最可能的原因是_____________________。

（I）大肠杆菌是与我们日常生活联系非常密切的细菌，请回答有关检测饮用水中大肠杆菌的问题：

（1）检测饮用水中大肠杆菌的含量时，通常将样品进行一系列的梯度稀释，将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，然后记录菌落数量，这种方法称为_____________。判断下面所示的4个菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是__________________。

（2）用上述方法统计样本中菌落数时是否需要设置对照组？__________（填“需要”或“不需要”），其原因是需要判断培养基___________，对于固体培养基应采用的检测方法是将________________的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（3）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________（填“消毒”或“灭菌”）处理；操作者的双手需要进行清洗和________________；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使其内蛋白质变性，还能损伤它的____________的结构。

（4）检测大肠杆菌实验结束后，使用过的培养基及其培养物必须经过________________处理才能丢弃，以防止培养物的扩散。

35.（II）   根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。

AATTC……G

G……CTTAA

为使载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是________。

（3）反转录作用的模板是____________，产物是__________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。

（4）基因工程中除质粒外，________和______也可作为载体。

（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_________________________。

2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）提取了高产植株的全部DNA后，要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是___________________，需要的条件有___________________________________________。

（2）如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段，该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的________________。

（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因________________________________________________________________________，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是_______________________________识别结合位点。

（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取________________________________________技术。

(2) 图中过程(2)是基因工程的第二步，即：                            。

(3) 图中过程(3)是用人工方法，使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴细菌或病毒感染细胞的途径。一般将受体大肠杆菌用       处理，使细胞处于能吸收外源DNA的生理状态，这种细胞称为__________细胞，再与溶于缓冲液的表达载体混合，在一定的温度下完成转化。

(4)检测大肠杆菌B是否导入了质粒或重组质粒，可采用的方法是将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的，说明已导入了质粒A或重组质粒，反之则没有导入。因为普通质粒A和重组质粒上都有                        。

(5)如果把已经导入了普通质粒A或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，出现的现象是有的能生长，有的不能生长。其中导入             的细菌不能生长。

(6)应用___________________杂交技术可检测工程菌是否表达出人的生长激素。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

(1)cDNA文库属于_____基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的_____反转录产生的cDNA片段，与________连接后储存在一个受体菌群中。

(2)切割DNA分子的工具是_______________，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的________________断开，形成黏性末端或平末端。

(3)基因工程中所使用的DNA连接酶有两类。既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端的是________DNA连接酶。

(4)如果受体细胞是大肠杆菌，需要用________处理细胞，使之成为感受态细胞，才能吸收DNA分子。

干扰素是动物或人体细胞受病毒感染后产生的一类糖蛋白，具有抗病毒、抑制肿瘤及免疫调节等多种生物活性。回答下列问题：

(1)干扰素的作用机理是：干扰素作用于宿主细胞膜上的相应受体，激活细胞核中基因表达产生多种抗病毒蛋白，其中有些蛋白可通过激活____________使病毒的RNA水解；有些则可与__________(细胞器)结合，通过抑制病毒多肽链的合成发挥抗病毒作用。

(2)利用基因工程产生干扰素的方法之一：利用________酶将干扰素基因与牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件连接在一起构建基因表达载体，采用__________的方法导入牛的受精卵细胞中，经胚胎早期培养至________________期，移植入母体内发育成熟，即可获得能产生干扰素的转基因牛。

(3)由于干扰素在体外保存困难，可利用蛋白质工程对干扰素进行改造，基本途径是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的________→找到相对应的脱氧核苷酸序列。

基因工程的整个过程包括工程菌（细胞）的设计构建和基因产物的生产两大部分。回答有关问题：

（1）基因工程操作中需要使用的工具酶是                            。

（2）基因工程中将外源基因（例如抗除草剂基因）导入受体细胞（例如玉米）中的运载体包括                   （写出2种），运载体必须具备的功能，除了能将外源基因转移到受体细胞中，还必须具备能为外源基因提供在受体细胞中的                  能力。

（3）农杆菌因具有含T-DNA（可转移的DNA）的Ti质粒备受青睐。能将目的基因导入受体细胞的重组Ti质粒又称为              ，其组成至少包括5个不可缺少的DNA序列：除目的基因、终止子外，还有                            （缺一不可）。

（4）获得目的基因（抗除草剂基因）的方法有：以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是                            ；又可通过技术扩增目的基因；还可通过化学方法直接获得              。检测抗除草剂基因导入转基因生物细胞后，是否能稳定维持和表达其遗传特性的方法是                            。

（1）人体组织内的A物质是一种重要的药用蛋白质，可以通过基因工程从母羊的乳汁中获得。获取A基因和载体用________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。将其导入母羊受精卵常用的方法是________。检测目的基因是否插入到受体细胞DNA上，可采取___技术。

（2）在胚胎工程的应用中，为获取更多的卵（母）细胞，要对供体动物注射______，使其超数排卵。从良种的雄性个体采集的精子需要_____后才能进行受精作用。体外受精可以在____或者专用受精溶液中完成受精。

（3）一般当早期胚胎发育到______阶段时，将胚胎移入受体（代孕）个体子宫内断续发育。移植后的胚胎在受体子宫内存活，其生理基础是_______。

（4）蛋白质工程是以蛋白质分子的空间结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过____，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活需要。

（5）我国西北土地沙化和盐渍化非常严重，原因有多种，其中一个主要原因是超载放牧导致草地退化。试分析上述事实主要违背了生态工程的_________原理。

(1)图中对良种奶牛进行处理时用到的激素      ,①过程必须用到      酶,②过程使用的是             酶。④表示基因工程中         过程;若方法C是最常用的将目的基因导入动物细胞的方法,则方法C是           。 

(2)图中采用的生物工程技术A和B分别是指                 和        。 

(3)为实现人血清白蛋白基因在转基因牛E的乳腺细胞中表达，应让该血清白蛋白基因和 的启动子等调控组件结合在一起。如果转基因牛E的牛奶中含有               ,则说明人血清白蛋白基因在个体水平已表达成功。