我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛,下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图.图中质粒表示基因工程中经常选用的载体-pBR322质粒,Amp
r表示青霉素抗性基因,Tet
r表示四环素抗性基因.根据上图回答下列问题(限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同):
(1)过程②必需的酶是 ______ ,过程④必需的酶是 ______ .⑤过程中为提高成功率,常用 ______ 溶液处理大肠杆菌.
(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割,用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时,则形成的DNA片段共 ______ 种,其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是 ______ .
(3)如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322,完成过程④、⑤后,将三角瓶内的大肠杆菌(不含Amp
r、Tet
r抗性质粒)先接种到甲培养基上,形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落,分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上,一段时间后,菌落的生长状况如图所示.接种到甲培养基上的目的是筛选 ______ 的大肠杆菌,含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态是 ______ .