[生物--选修3：现代生物科技专题] 略

（1）农杆菌中的Ti质粒上T-DNA具有__________________________________的特点。图中D过程的方法称为____________________。A过程所需的酶是_____________________________。

（2）图中重组质粒，除了含有目的基因外，还必须有________________________和复制原点；培育转基因玉米成功的标志是____________________________；目的基因能否遗传给后代常采用的检测方法是_______________。

请回答：

⑴①代表的是______过程，若要在体外获得大量的A基因，常采用______技术，该技术必须用到______等酶。

⑵过程③采用的实验技术是______，该技术的原理为______，在此过程中特有的诱导因素为______，获得的X是______。

⑶单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是______。

⑷对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的______所制备的疫苗．对该传染病疑似患者确诊时，可以用图中的______进行特异性结合检测。

多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中， PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图。据图回答下列问题：

(1)若已获取PG的mRNA，可通过_______获取PG基因。已知BamHI的识别序列如图2甲所示，请在图2乙相应位置画出目的基因两侧的黏性末端。

(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有____的培养基进行筛选之后，还需将其置于质量分数为0.3g/ml的蔗糖溶液中，观察细胞____现象来鉴别细胞壁是否再生。

(3)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与_________互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。若________，则可确定转基因番茄培育成功。

(4)将转入反向链接PG基因的番茄细胞培育成完整的植株，需要用_______________技术；其中，愈伤组织经______形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加____________。

将苏云金杆菌Bt蛋白的基因导入棉花细胞中，可获得抗棉铃虫的转基因棉，其过程如下图所示（注：农杆菌中Ti质拉上只有T－DNA片段能转移到植物细胞中）。

（1）过程①需用同种          酶对含Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。

（2）过程③中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让            进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是                                  。

（3）若过程④仅获得大量的根，则应在培养基中增加            以获得芽；部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是                             。

（4）检验转基因棉的抗虫性状，常用方法是                。种植转基因抗虫棉能减少       的使用，以减轻环境污染。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答:

(1)获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和                        。

(2)获取目的基因还可以使RNA 形成cDNA。获得目的基因可以通过            技术大量扩增。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含                         的培养基上进行。 

(3)图中质粒除了所示结构以外，还必须含有 才能构成一个完整的基因表达载体。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是图中的         。 

(4)过程①可采用的操作方法是 。 ②过程表示        。 

(5)为检测人乳铁蛋白是否成功表达,可采用               技术。 

【生物——选修3：现代生物科技专题】

I．科学家将人的生长激素基因与pBR322质粒进行重组，得到的重组质粒导入牛的受精卵，使其发育为转基因牛，再通过细胞工程培育为转基因克隆牛。pBR322质粒含有两个抗生素抗性基因和5个限制酶切点(如图2)。将重组质粒导入大肠杆菌，并成功地在大肠杆菌中得以表达。请据图回答问题。

(1)图1中显示的人的生长激素基因是通过人工合成的，图中①过程需要的酶是__________。该过程所依据的碱基互补配对原则是___________________________(用字母和箭头表示)。

(2)图1中的mRNA是从人体的_______________细胞中获取。

(3)重组质粒形成与否需要鉴定和筛选，方法是将重组质粒的DNA分子导入大肠杆菌，通过含抗生素的培养基进行培养，观察大肠杆菌的生长、繁殖情况进行判断，如图3所示：

如果受体菌在培养基A上能生长、繁殖形成菌落，而不能在培养基B上生长、繁殖，则使用限制酶a的切点是图2中的___________________________________，即目的基因插入了___________________中。

II．SRY基因是Y染色体上的性别决定基因，SRY—PCR胚胎性别鉴定技术能准确鉴定早期胚胎性别，应用前景十分广阔。请回答相关问题：

用SRY—PCR法鉴定胚胎性别需要充足的材料并保证被测胚胎的活性，因此，首先从被测胚胎中取出几个细胞，提取_______________，然后用________________的一段脱氧核苷酸序列作引物，进行PCR扩增。鉴定扩增产物，制备具有SRY基因特异性的探针，出现阳性反应者，胚胎为__ ___性。

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（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是                  。科研人员还在两种引物的一端分别加上了                                    和            序列，以便于后续的剪切和连接。

（2）过程②所构建的基因表达载体中未标注出的必需结构还有                ，过程③中需先用        处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（3）过程④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过               过程获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是                                    。

（4）治疗中发现，用于口服的α-干扰素在胃中会受到一定程度的破坏影响其功效，需要利用                        技术加以改造，以达到满意效果。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

下列有关基因工程和细胞工程方法的问题:

(1)用两种限制酶XbaⅠ和SacⅠ(两种酶切出的黏性末端不同)切割某DNA，获得含目的基因的片段。若利用该片段构建基因表达载体，应选用上图中的     Ti质粒。

(2)将受体细胞培养成植株需要应用         技术，该技术的理论依据是                    。

(3)培育转基因植物过程的核心步骤是           ，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以传给下一代，同时，使目的基因能够            和发挥作用。该阶段利用DNA连接酶连接被限制酶切开的               键。

(4)组成基因表达载体的单体是             。基因表达载体中的启动子是            识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因转录。

人们预防与诊疗传染性疾病经常使用疫苗和抗体，已知禽流感传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，相应疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：

(1)过程②代表基因工程操作步骤中的            ；基因工程的核心步骤是   (填序号)，该过程所需的工具酶有           。

(2)过程⑦利用的生物学原理是            ，获得的X称为             

(3)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的        制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行       比较，或用图中的               进行特异性结合检测。