科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程中Rubi-sco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：

(1)PCR过程所依据的原理是____________，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_________；扩增过程需要加入__________________________酶。

(2)启动子是一段有特殊结构的DNA片段，其作用是______________________________。PCR定点突变技术属于__________的范畴。

(3)可利用定点突变的DNA构建基因表达载体。常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的______________技术，才能最终获得转基因植物，该技术利用的原理是________________。

I．玉米自交系（遗传稳定的育种材料）具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株。获得抗除草剂转基因玉米自交系，技术路线如下图。

（1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是______（单选）。

①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

A．①③           B．①④        C．②③       D．②④

（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是__________，自交系_______的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。

（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含_____________________的选择培养基。

（4）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是_______________（多选）。

A．无农杆菌附着的未转化愈伤组织

B．无农杆菌附着的转化愈伤组织

C．农杆菌附着的未转化愈伤组织

D．农杆菌附着的转化愈伤组织

（5）组织培养获得的转基因植株（核DNA中仅插入一个G基因）进行自交，在子代含G基因的植株中，纯合子占_____________。继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合自交系。

II．胚胎工程是指对动物_______________或____________所进行的多种显微操作和技术处理。此工程是以体内受精过程和早期胚胎发育为理论基础的。哺乳动物精卵细胞发生上最大的区别是卵子在        （时期）完成___________________。受精作用发生时精子首先发生__________，之后当第一个精子接触卵细胞膜时发生_________________________。受精作用的场所是_____________。受精卵形成后，开始进行旺盛的有丝分裂。经历卵裂期、_____________、________________、原肠胚，经组织器官分化，发育成完整的生物个体。其中__________出现最早的分化现象。

“生物导弹”是免疫导向药物的形象称呼，由单克隆抗体与药物配合而成。单克隆抗体能自动导向，在生物体内与特定目标细胞或组织结合，并由其携带的药物产生治疗作用。单克隆抗体的制备过程如下图所示，分析回答下列问题：

(1)图中A过程是从小鼠的脾脏中取得____细胞，提取该细胞之前，给小鼠注射的特定物质相当于______；B过程得到的杂交瘤细胞的特点是__________________。

(2)体外培养杂交瘤细胞的培养基与用于植物组织培养的培养基在物理性质上的主要区别是前者要用____，从培养基的成分来看，前者培养基中除了添加必要的营养物质外还需要加入含天然成分的____________。

(3)特异性抗体也可以通过常规方法来制备：向动物反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物的血清中分离所需抗体。与这种常规方法相比，单克隆抗体具有____________________________等优点（答出三点即可）。制备单克隆抗体的过程中至少需要____次对细胞的筛选。

（2）体外重组的质粒可通过Ca²⁺参与的_______方法导入大肠杆菌细胞：而体外重组的噬菌体DNA通常需与_______组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞，在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是__________。

（3）某农业生态工程基地按照生态和经济规律，对种植业和养殖业进行了优化设计．通过套种、间种和轮种等技术的应用，增加农作物的种类，使种植的农作物为该生态系统组成成分中的消费者提供更多种类的食物。应用的生态学原理是___________________。

如图为培育转基因抗虫棉的技术流程。请据图回答：

（1）进行过程①运用的工具酶是_____、________，限制酶的特点是_______________。

（2）基因工程核心步骤的名称是_____________，其作用__________，______________________。

（3）③过程的培养基除含有必需的营养物质、琼脂外，还需要添加________

（4过程③④所表达的两个重要的生理现象是_________、_________。③④合起来称之为____________，其理论基础____________。

（5）过程②采用最多的方法是___________。农杆菌中的Ti质粒上T-DNA具有___________________________的特点。把目的基因导入受体细胞，检测目的基因是否发挥功能作用的第一步是__________，检测时常用的方法是__________。

2011年11月，武汉大学利用细菌将人的血清白蛋白基因导入水稻体内，借助水稻合成了人的血清白蛋白，这种蛋白质和人体自然产生的这类物质是完全一致的，这一成果轰动了生物界。结合图示回答转基因水稻培育过程的相关问题。

(1)限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是—C^↓AATTG—和—G^↓AATTC—。为保证重组质粒表达载体的准确构建，应该怎样操作？

______________________，______________________，_________________________。

(2)②过程常用的细菌是________。

(3)③经历的生理过程主要有________和________两个阶段。培育出转基因水稻完整个体所依据的生物学原理是____________________________。

(4)基因工程的最后步骤是目的基因的检测与鉴定，在此步骤可对培育的植株进行分子水平的检测，可检测的物质有___________、__________、________。

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶               分别对                 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为               种、               种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有               作为标记基因。

（3）研究人员通常采用               法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用               技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的               过程。

科学家利用植物体细胞杂交技术成功获得了番茄—马铃薯杂种植株，为了便于杂种细胞的筛选和鉴定，科学家利用红色荧光和绿色荧光分别标记番茄和马铃薯的原生质体膜上的蛋白质，其培育过程如图所示，请据图回答下列问题：

（1）植物体细胞杂交依据的生物学原理有________________________________。

（2）过程①常用的酶是____________________，细胞融合完成的标志是__________________。

（3）植物原生质体融合过程常利用化学试剂____________诱导融合，在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察，根据细胞膜表面荧光的不同可观察到__________种不同的原生质体(只考虑细胞两两融合的情况)，当观察到______________________________________时可判断该原生质体是由番茄和马铃薯融合而成的。

（4）过程④中的培养基常添加的植物激素是__________________________。

（5）若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞内有n条染色体，则“番茄—马铃薯”细胞在有丝分裂后期含______条染色体。若杂种细胞培育成的“番茄—马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于____________植株。

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶的切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶             对含鱼抗冻蛋白基因的DNA进行切割，切割后产生的DNA片段有      种，用限制酶             对质粒进行切割，切割后产生的DNA片段有      种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有                作为标记基因。

（3）研究人员通常采用           法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的            和            过程。

下图是植物组织培养的简略表示。据此回答：

（5）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物——紫草素，培养将进行到（填编号）        。