2．
回答下列有关生物工程的问题．
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1（图中数字序号表示的是相关过程）．
图1
图2
（1）在核移植前应去除
的细胞核．
（2）过程②，重组胚胎培养到一定时期时，可从其
中分离出的ES细胞的特点是
．
（3）过程③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体，具体过程如图2．图中Amp
r表示青霉素抗性基因，Tet
r表示四环素抗性基因，限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同．可以根据Rag2基因的
设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段．为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，④过程采用的酶是
，⑤过程采用的酶是
．如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成的DNA片段有
种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段占
．
（4）在ES细胞培养液中加入
可以体外诱导定向形成造血干细胞．
（5）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的
，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验．