科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1。图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒，据图回答：

（1）重组细胞的细胞核来自______________细胞。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入上皮细胞是因为ES细胞具有______________。

（3）步骤③，需要构建含有干扰素基因______________。

（4）从基因组数据库中查询干扰素基因的核苷酸序列，以便根据真训练设计合成引物用于PCR扩增，PCR扩增过程至少第____________轮循环后才能获得纯目的基因片段（仅含引物之间的序列）。

（5）对于干扰素基因片段和质粒进行双酶切时，可选用限制酶的组合为____________或____________。

（6）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用___________的方法。

(1)步骤①核移植前为获得更多的卵母细胞，采用________处理使其超数排卵，从输卵管中冲出的卵子处于________时期，去除卵母细胞的________(结构)。

(2)培养细胞过程中，要置于CO₂培养箱中，其中CO₂的主要作用是________。

(3)图中ES细胞来自________时期的________细胞。步骤③中需要先利用PCR技术扩增正常基因片段，可以根据正常基因的________设计引物，PCR技术中使用的酶为________。为检测目的基因是否表达，采用的方法为________。

（1） 由过程①获得的A为____________；过程①中需用到的酶有____________；过程①中，PCR扩增人凝血因子IX基因前需根据已知的一小段核苷酸序列合成出________。

（2） 利用A中的_________基因特性来筛选鉴定出含有人凝血因子IX基因的成纤维细胞。

（3） 进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生______________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

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请根据上述材料回答下列问题：

（1）图中过程②常用的方法是                 ；过程③利用的生物技术是              ；在进行过程④前，利用          技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。

（2）用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成必须有启动子、        、        、         等部分。

（3）cDNA属于        基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的mRNA通过              产生cDNA片段，与           连接后储存在一个受体菌群中。

（4）PCR是一项利用DNA复制的原理在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。其基本过程是：加热至90～95℃使          →冷却至55～60℃使         结合到互补DNA链→加热至70～75℃使         从引物起始进行互补链的合成，如此反复进行。

请依材料所给出的信息分析回答下列问题：

（1）在基因工程操作程序中，                是基因工程的核心，为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的         和       之间。

（2）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg^2＋）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、              和                 。

（3）据材料Ⅱ，在过程②中，将成纤维细胞置于5％CO₂的气体环境中，CO₂的作用是         。在过程③中，用           处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行          处理。

（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是               。在胚胎移植前，通过             技术可获得较多胚胎。

（1）短时间内大量扩增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因经常采用                 技术。过程①是将抗凝血酶Ⅲ蛋白基因导入受精卵，该过程常用的方法是                 。            

（2）过程②包括             技术和               技术；为获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊，在过程②还可使用          技术。

（3）若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用              技术。

（4）如果检测发现抗凝血酶Ⅲ蛋白基因被成功导入了受精卵，但却没有检测到抗凝血酶Ⅲ蛋白的存在，那应该考虑分别位于目的基因首端的          和末端的          没有设计好，应从这方面进一步改善。

请回答：

（1）图中重组细胞的细胞核来自            细胞，早期胚胎移入受体子宫后继续发育，经桑椹胚、囊胚和             胚最终发育为克隆猪。

（2）在PCR过程中可检测出cDNA中Bcl-2 cDNA的分子数，进而计算总mRNA中Bcl-2 mRNA的分子数，从而反映出Bcl-2基因的转录水平。

①图中X表示                 过程。

②从基因组数据库中查询Bcl-2 mRNA的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成                用于PCR扩增，PCR扩增过程第一轮循环的模板是                    。

 
（1）控制小鼠尾形的基因位于____（2分）（常/X/Y）染色体上，子一代雄鼠的基因型是____________（2分）。 

（2）为确定转基因小鼠DNA插入的具体位置，研究者让该转基因小鼠与非转基因弯曲尾雄性小鼠杂交，统计子代的表现型种类及比例，并进行了以下分析（不考虑交叉互换）：若子代表现型及比例为弯曲雌﹕正常雌﹕弯曲雄﹕正常雄=                    （2分），则该DNA片段的插入位置属于第一种可能性；若子代表现型及比例为弯曲雌﹕正常雌﹕弯曲雄﹕正常雄=                       （2分），则该DNA片段的插入位置属于第二种可能性。

（3）培育该转基因小鼠，需运用________技术将含有外源DNA的体细胞的细胞核与去核的______细胞融合得到重组细胞，培养至早期胚胎后通过                        技术转移至受体体内。 

（4）外源DNA影响B基因表达的机制是：二者转录的产物碱基互补配对从而抑制                     。 

（5）图二中的两条长链为B基因的两条单链，若要对B基因进行PCR扩增，应选用引物                      。该过程中需使用                        酶以合成子链中的

                     键。

（1）基因工程中，A→B利用____________技术，依据的原理是__________，其中①为__________过程。

（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中③用到的生物技术主要有动物早期胚胎培养和____________。

（3）B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是____________，要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：_____________________。

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(1)蜘蛛丝基因能在山羊体内成功表达的原因是________，常用山羊胚胎干细胞作为受体细胞的原因是________。

(2)为提高胚胎的利用率，可对囊胚进行________获得二分胚；同时，可以通过取样________(“滋养层”、“内细胞团”)细胞进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。将囊胚移人代孕山羊体内属于

________技术．此技术对代孕受体的要求是________。

(3)可将蜘蛛丝基因导入受精卵，使蜘蛛丝基因整合到山羊DNA中．为得到较多的受精卵，需用________处理供体雌羊。为鉴定蜘蛛丝基因是否成功表达，常用________技术进行检测。