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            • 1.
              43、科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞(iPS),继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠,流程如下:

              (1)从黑鼠体内获得体细胞后,对其进行的初次培养称为            ,培养的细胞在贴壁成长至充链满培养皿底时停止分裂,这种现象称为          

              (2)图中2—细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得,该过程称为              ,也可从灰鼠体内取出卵子,通过              后进行早期胚胎培养获得。

              (3)图中重组囊胚通过              技术移入白鼠子宫内继续发育,暂不移入的胚胎可使用              方法保存。

              (4)小鼠胚胎干细胞(ES)可由囊胚的              分离培养获得,iPS与ES细胞同样具有发育全能性,有望在对人类iPS细胞进行定向            后用于疾病的细胞治疗。

            • 2.
              白血病是由于造血干细胞增殖分化异常而引起的恶性增殖性疾病.目前治疗白血病的主要方法是骨髓移植,但骨髓配型的成功率较低,大大限制了白血病的治疗.随着基因工程的日渐兴起,迎来了基因治疗白血病的曙光.请回答下列相关问题:
              (1)骨髓移植必须进行骨髓配型实验,原因是 ______ .目前,临床上通常通过使用 ______ 来提高造血干细胞移植的成活率.
              (2)造血干细胞移植之前先要进行培养.动物细胞培养一般分为 ______ 和 ______ 两个阶段.对于培养的环境条件,除需要适宜的温度、无菌无毒等以外,还要向培养液中通人氧气和二氧化碳,通人氧气的目的是 ______ ,通人二氧化碳的目的是 ______ ;对子所用的培养液,应定期更换,其目的是 ______ .
              (3)在进行细胞移植前,有时需对移植的细胞进行基因改造.要了解基因改造是否成功,可在分子水平上检测是否翻译成了相应的蛋白质,常用的方法是 ______ .
              (4)上述使用的正常细胞,通常为 ______ 代以内,以保持细胞正常的二倍体核型.
              (5)哺乳动物的胚胎干细胞是从 ______ 中分离出来的一类细胞,可以在体外被诱导 ______ 形成新的组织细胞,这使科学家进一步培育人造骨髓成为可能.
            • 3.
              请回答下列现代生物科技问题:
              (1)基因工程的工具之一限制酶主要是从 ______ 中分离纯化出来的.将目的基因导入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为 ______ ,从分子水平检测目的基因是否翻译成蛋白质的方法是 ______ .
              (2)将目的基因导人动物细胞培育转基因动物常用的受体细胞是 ______ ,经早期胚胎培养和 ______ ,使其发育成具有新性状个体.
              (3)胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞,在功能上具有 ______ ,在 ______ 细胞上或在添加抑制因子的培养液中培养可以增殖而不发生分化.
              (4)转基因产品的安全性问题一直是争论的焦点,原因之一是由于科学发展水平的限制,目前科学家对基因的 ______ 、基因间的相互作用以及基因的调控机制等都了解的相当有限.
            • 4.
              2006年,日本学者山中伸弥成功将人体皮肤细胞诱导形成多能干细胞--“iPS细胞”,iPS细胞可以分裂、分化为神经元、心肌、肝等多种细胞.下列叙述不正确的是(  )
              A.iPS细胞分化为多种细胞的过程体现了iPS细胞的全能性
              B.iPS细胞分化形成的心肌细胞和肝细胞中的RNA存在差异
              C.人体皮肤细胞诱导产生iPS细胞属于一种脱分化过程
              D.若在实际中应用该过程中的技术可提高器官移植的成功率
            • 5.
              Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:

              (1)步骤①中所选的卵母细胞应处于 ______ 期.
              (2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其 ______ 分离出ES细胞,ES细胞在形态上表现为 ______ 的特点.
              (3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的 ______ .可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成 ______ ,利用 ______ 技术扩增Rag2基因片段.用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 ______ 酶的酶切位点.
              (4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质,用抗Rag2蛋白的抗体进行 ______ .
            • 6.
              目前,器官移植面临的世界性难题是器官短缺.现代生物工程技术的兴起迎来了解决这一难题的曙光.
              (1)利用转基因动物作器官移植的供体.科学家将目光集中在小型猪身上,实现这一目标的最大难题是 ______ .科学家试图用基因工程方法对动物器官进行改造:向器官 ______ (填“供体”或“受体”)基因组中导入某种调节因子,以抑制 ______ (抗原或抗体)决定基因的表达,或设法除去该基因,再结合克隆技术,培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪.
              (2)利用克隆技术获得器官.据图回答下列问题
              1、图示过程应用到的生物技术主要有 ______
              2、若将上述技术用于白血病病人的骨髓移植,图中患者是O型血,提供卵细胞的女性是AB型血,则骨髓移植成功后患者的血型是 ______ 型.
              3、按上述方法克隆器官在器官移植方面的主要优点是 ______ .
              4、在克隆人的问题上,中国政府的态度是 ______
              ①禁止生殖性克隆人②坚持四不原则(不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验) ③不反对治疗性克隆 ④不反对生殖性克隆和治疗性克隆
              A.①②B.①②③C.②③④D.①②③④
              (3)利用ES细胞培养技术获得移植器官.ES细胞在培养液中加入 ______ 可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化.如果要移植自身ES细胞培育出的器官,患者还是否需要长期使用免疫抑制药物? ______ (是或否)
            • 7.
              回答下列关于胚胎工程的问题
              (1)供体胚胎在代孕母畜子宫内存活的免疫学基础是 ______ ;在胚胎分割技术中,由于已经出现 ______ ,所以要均等分割囊胚的 ______ ,该结构将发育成胎儿的 ______ .
              (2)若要对胚胎的性别进行鉴定,应取囊胚的 ______ 细胞进行,所运用的技术是 ______ .
              (3)ES细胞在结构在结构上的特点是 ______ ,体外培养ES细胞,加入 ______ 可使其只分裂不分化.
            • 8.
              如图是转基因小鼠的培育过程示意图,Gfp是绿色荧光蛋白基因,请分析回答:

              (1)过程①需要用到 ______ 酶.过程②将目的基因导人胚胎干细胞常用的方法是 ______ 培养胚胎干细胞的培养液中除加人各种营养物质外,通常还需加入 ______
              (2)表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、 ______ ______ 、终止子和复制原点等
              (3)自然状况下胚胎干细胞是由动物的早期胚胎或 ______ 中分离出来的一类细胞胚胎干细胞在形态上表现为体积小,细胞核大,细胞核仁明显;在功能上具有 ______
              (4)图中载体上的Neo基因是B抗生素抗性基因,图中步骤③所用的G418是B抗生素(对细胞有毒害作用),培养液添加G418的目的是 ______
              (5)图中步骤⑤要将细胞注射入囊胚的 ______ 位置;步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理,目的是 ______
              (6)检测目的基因是否翻译成蛋白质,可从小鼠c体内提取蛋白质,用 ______ 杂交的方法加以检测.
            • 9.
              Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:

              (1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 ______ .
              (2)步骤②中,重组胚胎培养到 ______ 期时,可从其内细胞团分离出ES细胞.
              (3)步骤③中,需要构建含有基因Rag2的表达载体.可以根据Rag2基因的 设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段.用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 ______ 酶的酶切位点.该基因表达载体上除含Rag2基因外,还应含有 ______ (至少写出两个).用 ______ 方法将基因表达载体导入ES细胞.
              (4)为检测Rag2基因的表达情况,利用 ______ 原理,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ______ ,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验.
            • 10.
              供体细胞的抗原决定基因能编码抗原或与抗原形成的关的酶,导致器官移植过程中出现免疫排斥.科学家利用基因工程方法对猪的基因组进行改造,以解决人体移植器官的短缺和免疫排斥问题.回答下列问题:
              (1)对猪基因组进行改造,可以选择某种有调控作用的目的基因,重组后导入爱体细胞,以达到抵制猪抗原决定基因 ______ 的目的.进行DNA重组时需要使用的工具酶是 ______ .
              (2)选择猪胚胎干细胞作为受体细胞,胚胎干细胞是由 ______ 或 ______ 中分离出来的一类细胞.将目的基因导入后,利用标记基因的作用 ______ 含有目的基因的受体细胞.
              (3)将含有目的基因的胚胎干细胞注入猪囊胚,而后将囊胚通过 ______ 技术移入受体子宫,获得转基因猪.
              (4)采用核移植技术克隆转基因猪时,应选用处于 ______ 期的卵母细胞作为受体细胞;随后从构建的重组胚胎中分离得到胚胎干细胞,经诱导分化形成多种器官,这是利用了胚胎干细胞的 ______ .
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