在生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。回答下列与微生物的培养与利用有关的问题：

（1）下图是利用______________法将微生物接种到固体培养基上，把混合的菌种逐步稀释分散获得单个菌落。接种后培养基应______________放在37℃恒温培养箱中进行培养。

（2）分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O、琼脂。若此培养基用于筛选尿素分解菌，则应除去上述培养基成分中的________，并加入______________和_____________。培养基中加入酚红作指示剂的原因是尿素分解菌能合成________将尿素分解为氨，使培养基pH发生改变，使菌落周围呈现红色。

（3）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，取0．2ml稀释液涂布，得到以下统计结果：

甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260；

乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232；

丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；

在三位同学的统计中只有一位同学的统计结果是相对准确可信的，按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是______________。

（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行_____________处理后，才能倒掉。

（5）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量______，因为_______________． 

（2）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是 _________ ．对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目偏少，原因是_________________________ 。

（3）在实验室应采用___________法对培养基进行灭菌处理，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_____________条件下进行．若发现在⑤中菌落过多，无法准确计数，可以将③中取出的菌液_____________________________ ．

Ｉ下图表示单克隆抗体制备过程示意图。据图回答：

（1）淋巴细胞是由动物体骨髓中的造血干细胞分化、发育而来得到，B淋巴细胞从小白鼠体内分离之前,应对小白鼠进行的处理是_________________ ,该处理的实质是在小白鼠体内发生_____________过程。骨髓瘤细胞与进行原代培养的细胞相比较,遗传物质发生的主要变化是___________,从而违背了“程序性细胞死亡”规则,打破了细胞产生与细胞死亡的动态平衡。

（2）____________________技术是单克隆抗体技术的基础，根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于__________培养基，试设想运用生物工程其它领域的技术制备单克隆抗体的另一条途径________________ 。

（3）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点，又具备B淋巴胞的_______特点。单克隆抗体与常规的血清抗体相比 ，最大的优越性是_______________，_______________。                                            

II绿色荧光蛋白(GFP)能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：

（1）①过程需要限制酶切断________________键，使DNA分子断裂，其结果形成_____________。图中过程②常用的方法是_____________ ；过程③利用的生物技术主要是___________________；在进行过程④前，利用______________技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。

（2）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能,且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以作为基因表达载体上_____________。

（3）获取外源基因若需在短时间内获得大量的某种外源基因，通常采用 _________ 技术．在供体雌鼠发情周期的某一阶段，用______激素处理促使卵巢里大量卵泡成熟并排出，称为超数排卵．在让供体母鼠与健康公鼠交配的同时，让代孕母鼠与结扎公鼠进行交配，使代孕母鼠与供体母鼠的生理条件达到同步或者一致，称为 __________ 处理．将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因生物进行_________________。

回答下列微生物及其培养问题

　　农业上广泛使用的除草剂在土壤中不易被分解，长期使用会污染土壤。为了修复被污染的土壤，可按下图程序选育出能降解该除草剂的细菌。（注：已知该除草剂是一种含氮有机物；含一定量该除草剂的培养基不透明。）

（1）微生物培养过程中需要的营养物质主要有_________________。由于不同种类微生物的菌落特征表现不同，因此可以利用__________（填“固体”或“液体”）培养基来培养，通过观察菌落特征对微生物进行初步的鉴定和分类。

（2）培养基的配制主要包括如下步骤：①溶化，②调pH，③高温高压灭菌，④称量。这些步骤正确的顺序是__________。（填编号）

（3）实验中进行平板划线操作（如图乙、丙所示）的目的是__________。在具体操作时，首先要将接种环通过（填编号）__________（①紫外线；②酒精灯灼烧；③高压蒸汽）灭菌；第二次及以后的划线，总是从__________开始。

（4）为了选育出能降解除草剂的细菌，在配制培养基时需添加一定量的该除草剂，其原因是____________________。

（5）为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿__________培养。在培养基上产生的单个菌落在生态学中可以被称为__________。

（6）如果筛选能降解该除草剂的细菌结果如图丁所示（A~E分别表示不同的菌株），其中的B、D菌株周围无透明圈形成，说明____________________；如果从A~E菌株中选育高效的能降解该型除草剂的细菌，应选育菌株__________。

（7）为探究此除草剂的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图戊所示实验。该实验的假设是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质；该实验设计缺少对照处理，正确的对照处理是__________________。

下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。

(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于________。

(2)若根据用途划分，该培养基属于________(填“选择”或“鉴别”)培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？________________，并用________作为指示剂。

(3)在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行________；操作者的双手需要进行清洗和________。

(4)图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：______________和____________，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的________________。

           图1                           图2

某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题：

⑴培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和_______。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是___________和____________。

⑵对培养基进行灭菌，应该采用的方法是___________。

⑶为了尽快观察到细菌培养的实验结果,应将接种了湖水样品的平板置于____________中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_________作为对照进行实验。

⑷培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越__________。

⑸细菌培养常用的接种方法有_________________和_____________________。

选考题：【生物——选修1：生物技术与实践】

细菌荚膜的观察是微生物形态结构观察的基本内容之一。硅酸盐细菌在无氮培养基、钾细菌培养基及硅酸盐细菌培养基上均能生长，形成较厚的荚膜。下表1为无氮培养基的配方，表2是每种培养基上每个稀释度的菌落数及菌落直径的情况。请回答下列问题：

（1）根据无氮培养基的配方可知，从物理性质上看该培养基属于_____________培养基；从  功能上看，该培养基属于_____________培养基，理由是__________________________。

（2）常见的培养基用___________________灭菌。

（3）为统计硅酸盐细菌的数目，应采用_____________法进行接种，该方法的所有操作都应在_____________附近进行。

（4）进行上述实验的同时也设置了空白对照，若空白对照的培养基中_____________，说明培养基灭菌合格。根据表2中的数据可以得出，用_____________培养基筛选硅酸盐细菌的效果最好。

（1）柚皮易焦糊，宜采用____________法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过___________除去其中的固体杂质。

（2）筛选乳酸菌A的操作中，对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_______________。实验前需对超净工作台进行____________处理。

（3）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的______________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：

（1）培养基中加入化合物A的目的是筛选______，这种培养基属于____________培养基。

（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的____________，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是____________。

（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量____________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量__________。(两空均填“增加”或“减少”)

（4）某同学计划统计污水池中目的菌的总数，他选用10^－4、10^-5、10^－6稀释液进行涂布平板，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是________________，此对照实验的目的是证明培养基制备过程中________________。

某生物兴趣小组为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示。请分析回答问题：

(1)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入         指示剂，细菌合成的        将尿素分解为         ，pH升高，使指示剂变为红色。

(2)培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌，这种培养基属于        培养基。

(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的        和       ，实验中需要振荡培养，原因是                                      。

(4)下图是利用            法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。通常还可以           方法分离到一个细胞繁殖形成的菌落。

(5)关于图中的操作方法和结果，叙述正确的是             。

 A．操作时要将接种环放在火焰上灼烧灭菌

 B．划线操作须在火焰旁进行

 C．多次划线后培养才可以分离到一个细胞繁殖形成的菌落

 D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌