微生物强化采油(MEOR)是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油黏度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。以下是人们筛选、纯化和扩大培养该类微生物的实验操作。请回答下列问题：

(1)土壤是微生物的大本营，该类微生物应取自___________________________的土壤。

(3)接种后，应密封培养的原因是________________，培养一段时间后在培养基上形成降油圈，此时选取___________就可获得高效菌株。

(4)扩大培养过程中需要对微生物进行计数。取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220。则样品中微生物的数量为____________个／mL。该统计结果_________(填“低于”或“高于”)实际值。

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离这种酵母菌。操作如下：

(1)制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是______________________________________。获得纯净培养物的关键是____________________。

(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是__________________________。划线的某个平板经培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是______________________________。

(3)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一________的固体培养基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌__________。实验中所用培养基按功能属于__________培养基。

(4)若要检测土样中的酵母菌含量，应采用__________________法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是______________________________。然后，将1 mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，各在3个平板上分别接入每种稀释度的稀释液0.1 mL，经适当培养后，6个平板上的菌落个数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为____________个。

    （1）配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的____________和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要进行的操作是__________。

    （2）接种微生物的方法有很多，图1中过程①②③所示的方法为___________________。用该方法统计样本菌落数后，所得数据需要乘10ⁿ后，才可表示乳酸菌的数量（单位：个/mL），这里的n＝________________。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是_______________________。

    （3）为了检测乳酸菌对抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A、B、C三种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含抗生素A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A___________（填“敏感”或“不敏感”）；含抗生素C滤纸片周围的透明圈比含抗生素A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是____________。

(3)该实验小组对乳酸菌接种所采用的方法是___________________。根据酸奶样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的__________；根据三个平板中菌落数，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为_________个／mL，该方法测定的乳酸菌的含量和实际值相比，一般________(填“偏大”或“偏小”)。

(4)为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是______________________________。

农业生产上有一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解,长期使用会污染土壤。为修复被污染的土壤,可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌。已知该除草剂(含氮有机物)在水中溶解度低,含一定量该除草剂的培养基不透明。请回答下列问题:

(2) 在选育过程中,应将出壤浸出液接种于以____为唯一氮源的固体培养基上。为了筛选出高效的目的菌,可比较单菌落周围透明圈的大小。实验结果如图显示的A~E五种菌株中,____是最理想菌株。 

(3) 若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数,可采用的接种方法是___________。对分离的细菌数目统计时,统计的菌落数目往往比活菌的实际数目____。 

(4) 操作过程中有三种材料或用具需要消毒或灭菌:①培养细菌用的培养基与培养皿;②操作者的双手;③玻璃棒、试管、烧瓶和吸管。其中需要灭菌的是____(填序号)。 

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。

（1）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用________法接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。

（2）将培养基上的酵母菌菌株转接到________的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经大量扩增获得目的基因。

（3）将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。

（4）将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以_________和_________为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能_________，即说明所需菌株培育成功。