嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：

Ⅰ．利用大肠杆菌表达BglB酶

（1）PCR扩增BglB基因时，选用        杆菌基因组DNA作模板。

（2）右图为质粒限制酶酶切图谱。BglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入          和          不同限制酶的识别序列。

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为                                                              

Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响

（4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会        ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在         （单选）。

A．50℃    B．60℃     C．70℃     D．80℃

Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性

在PCR扩增BglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。

（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中              （多选）。

A．仅针对BglB基因进行诱变    B．BglB基因产生了定向突变

C．BglB基因可快速累积突变     D．BglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗,其有效成分是乙肝表面抗原蛋白。下图是将乙肝表面抗原基因转移到烟草细胞内生产乙肝疫苗的示意图,请据图回答下列问题。

（1）过程①表示             。为了使目的基因正常表达，其首端必须有       ，它是RNA聚合酶识别和结合的部位。若限制酶切出了平末端，要选择           进行连接。（填“E•coli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”）

（2）图中将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞的方法称为            。它是利用运载体Ti质粒中含有__________序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。

（3）图中将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞后，长芽、生根的过程中采用了细胞工程的_______________技术，该技术的原理是                    。

（4）检测烟草植株细胞中乙肝表面抗原基因是否合成出乙肝表面抗原蛋白，采用的方法是            。

将苏云金杆菌Bt蛋白的基因导入棉花细胞中，可获得抗棉铃虫的转基因棉，其过程如下图所示（注：农杆菌中Ti质拉上只有T－DNA片段能转移到植物细胞中）。

（1）过程①需用同种          酶对含Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。

（2）过程③中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让            进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是                                  。

（3）若过程④仅获得大量的根，则应在培养基中增加            以获得芽；部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是                             。

（4）检验转基因棉的抗虫性状，常用方法是                。种植转基因抗虫棉能减少       的使用，以减轻环境污染。

青蒿素是从黄花蒿茎叶中提取的抗疟疾药物。通过组织培养获得青蒿素的途径如图所示。请回答：

 （1）图中①和②分别表示黄花蒿组织培养过程中细胞的________和________过程。

（2）配制生芽培养基时生长素比细胞分裂素的比值应较________（填“高”或“低”）。配制培养基时通常加入凝固剂________。配制后还须用________法对培养基进行灭菌。外植体在接种前通常可用体积分数为________的酒精进行消毒。

（3）为了得到高产细胞系，通常要用酶解法获得原生质体，用________酶和________酶在0.5～0.6moVL的________溶液环境（较高渗透压）下去壁。

（4）科研人员利用转基因技术用细菌作为工程菌获得青蒿素的前体青蒿酸。先将目的基因与含有抗青霉素基因的质粒形成________，再与细菌菌液混合导入目的基因。用玻璃刮刀将稀释后的菌液用________法接种到含________的固体培养基上，经培养形成________，再进一步筛选和培养。若最终能从细菌中提取到________，则说明转基因成功。

【生物——选修3现代生物科技专题】

如图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题：

（1）图中cDNA文库______基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）．

（2）（2）①过程提取的DNA需要__________的切割，B过程是______________．

（3）（3）为在短时间内大量获得目的基因，可用________扩增的方法，其原理是______________．

（4）（4）目的基因获取之后，需要进行____________________________，其组成，必须有_____________、____________、____________以及标记基因等．此步骤是基因工程的核心．

下图表示以某种农作物①和②两个品种为基础，培育出④⑤⑥⑦四个品种的育种过程请回答下列问题:

（1）过程Ⅰ叫做         ；④Ab可称作         植株,获得该植株常采用的方法是               。

（2）通过I、Ⅱ过程培育出⑤所采用的育种方法的原理是      ；用I、Ⅲ、V培育出⑤所采用的育种方法是        ，其优越性主要表现为                。

（3）在图Ⅳ育种过程中，用秋水仙素处理的对象是              ，其发挥作用的时期为            。

图Ⅵ培育⑦的育种原理为                   。

（4）某植株产生了一种新的抗病基因，若要获得该抗病基因，应用              酶处理切割DNA分子，此酶的作用部位是DNA分子的                  。将该抗病基因转移到农作物体内的四个操作步骤为：

提取目的基因、              、将目的基因导入受体细胞、目的基因的表达与检测。

（1）图中cDNA文库               基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）。

（2）①过程提取的DNA需要              的切割，B过程是                    。

（3）为了在短时间内获得大量目的基因，可用                技术扩增数量。

（4）将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是                ，若要判断其能否在此植物体内稳定遗传可以用                技术进行检测。

（5）如果要想使该酶活性更强或具有更强的耐受性，需要对现有蛋白质进行改造，这要通过基因工程延伸——蛋白质工程。首先要设计预期的                 ，再推测应有的氨基酸序列，找到相对应的                     。

请回答有关下图的问题：

                                                                        图1                                                                                                      图2

(1)图1中①～⑤所示的生物工程称为蛋白质工程。该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对________的修饰或合成，对现有蛋白质进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。

(2)图1中④所示过程叫作________，该过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是________(请将模板链上的碱基写在前面)。

(3)如图2所示为一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，在基因尾端还必须有[2]________；图中[3]________的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。

(4)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，图2中序号[1]代表的是乳腺蛋白基因的________；且在图1中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含性染色体______的精子。

(5)为获得较多的受精卵进行研究，图1中⑥过程一般用激素对供体做________处理；为提高培育成功率，进行⑩过程之前，要对供、受体动物做________处理。若图1中的卵母细胞来自从屠宰场收集的卵巢，则其在⑧之前需进行体外培养，到________期方能进行受精。

(6)用________技术处理发育到________期或囊胚期的早期胚胎，可获得同卵双胎或多胎。若是对囊胚进行处理，则要注意将________均等分割。

请根据上述材料回答下列问题。

(1)用于培育绿色荧光小鼠的基因表达 载体的组成必须有启动子、GFP基因、　　　　和　　　　。图中过程②常用的方法是　　　　。 

(2)GFP基因的表达产物GFP(绿色荧光蛋白)由于在蓝光或紫外光的激发下发出荧光,因此在构建基因表达载体时,GFP这一目的基因可同时作为基因表达载体上的　　　　。 

(3)目前科学家们通过          工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等,该工程是直接改造GFP分子,还是改造GFP基因?　　　　。 

（1）根据表面抗原蛋白质的氨基酸序列推测出目的基因的________，进行人工合成，然后通过______技术大量扩增。

（2）基因工程的核心步骤是________，要利用________连接被限制酶切开的键。

（3）在表达过程中，启动子需与________识别和结合，从而驱动转录过程。

（4）实验证明，一定时间内间隔口服该疫苗3次效果更好，其主要原因是体内产生的________细胞数量增多，导致获得的免疫预防作用更强，持续时间更久。