铁皮石斛是一种名贵中药材，有生津养胃、降血糖和增强免疫力等作用，有效成分为石斛多糖、石斛碱等，温州雁荡山素有“中国铁皮石斛之乡”的美誉。请回答下列问题：

（1）用茎快速繁殖铁皮石斛时，给茎消毒时无须使用的是__________ （填“乙醇”，“无菌水”，“甘露醇”或“次氯酸钠”）。在细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基中培养茎的切段，待长出较多的_____________ ，将其进行______________ （处理）后再转入__________培养基中继续培养，直至长成幼苗，之后再后将苗移至草炭土或蛭石中进行___________，再转移至土中定植。

（2）研究发现，铁皮石斛的生长发育与其体内的内生菌密切相关。为进一步研究内生菌的作用，需要大量的内生菌进行相关实验。分离内生菌时采用的最简便的方法是________ 。

A．G6玻璃砂漏斗过滤法              B．血细胞计数法

C．划线分离法                       D．涂布分离法

    再将纯化的内生菌转移到液体培养基中进行_____________ 。

（3）研究发现，质量浓度为200mg /L的卡那霉素能有效抑制铁皮石斛细胞的增殖与分化。科学家欲利用卡那霉素，采用农杆菌转化法对现有铁皮石斛品种进行基因改良。在基因工程操作中，对于要导入受体细胞的_____________ 应同时带有目的基因和_____________ 基因，这样才能利用含有卡那霉素的培养基将成功导入目的基因的受体细胞筛选出来。

（4）鉴定铁皮石斛的品质，可通过苯酚—浓硫酸法测定石斛多糖的含量。其原理是石斛多糖水解成单糖并脱水生成糖醛衍生物后，与苯酚缩合产生橙黄色化合物，在490nm处测定光密度值，以不同浓度的葡萄糖溶液为标准溶液建立标准曲线，便可知道样品中石斛多糖的含量。

（5）为高效提取石斛多糖，可在提取液中加入_____________ ，以提高铁皮石斛的出汁率。

兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

（1）从兔肝细胞中提取mRNA，在_________________酶的作用下形成互补DNA，然后以此DNA为模板扩增得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成_____________，再导入用氯化钙处理的_________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是______（A.叶片在含适宜浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织 B.愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽  C.再生的芽在细胞分裂素含量较高的培养基上生根    D.愈伤组织在含适宜浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株）。

（2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适宜浓度甲醛且密封的试管中。将试管置于___________上，进行液体悬浮培养液。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是___________________________，从而使叶片保持正常的形态。

甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物， 回答下列问题：

（1)为了培养该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用       酶和       酶去除细胞壁，获得具有活力的       ，再用化学诱导剂       诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成       组织，然后经过       形成完整的杂种植株。这种培养技术称为        。

(2)假设甲和乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是       。

(3)这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到

的               等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。

在植物组织培养过程中，愈伤组织的成功诱导是至关重要的步骤。科学家以食用稗的成熟胚作为外植体，在基本培养基上研究植物生长调节剂对食用稗愈伤组织诱导的影响，实验结果如下表（注：愈伤组织诱导率（%）＝产生愈伤组织的外植体数/接种外植体总数×100%）。请回答相关问题：

（1）外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为      。从上表结果可以知道，在基本培养基中添加较高浓度的          有利于食用稗胚形成愈伤组织。

（2）影响愈伤组织成功诱导的因素除植物生长调节剂外，环境条件也是重要的因素。现给你提供200个已经消毒过的食用稗的成熟胚，在上述研究的基础上，探究光照对愈伤组织形成的影响。完成下面的实验步骤，预期实验结果并得出相关结论：

①将200个已经消毒过的食用稗的成熟胚平均分为甲、乙两组，分别接种到________（填培养基代号）培养基上；

②甲组置于光照条件下培养，乙组置于黑暗条件下培养，其它条件相同且适宜；

③培养一段时间后，计数甲、乙两组中形成愈伤组织的个数并计算愈伤组织诱导率。

预期实验结果并得出结论：

a．若                  ，则                                       ；   

b．若                  ，则                                       ；

c．若                  ，则                                       。

(1)江南某橘子盛产地想建立一个大型的果酒、果醋加工厂，需要的发酵菌种是_________和________。分离纯化这两种微生物的常用方法是：将10³-10⁷倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液铺平。这种接种方法称为_________________  。

(2)提取桔皮的胡萝卜素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是________________________________________________________________________。

(3)四川一果汁加工厂在制作橘子汁的过程中发现果汁有些浑浊，为提高出汁率，可加入适量的________________使果汁变得澄清。

(4)培养外植体的培养基中常用的凝固剂是________________。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值____________(填“高”或“低”)时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是______________________________________________。

（3）制作腐乳、果醋和泡菜时，需要通入氧气的是               ，腐乳制作中加盐腌制的目的除析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬外，还能够

（4）菊花的组织培养所需的培养基是           （填“固体”或“液体”）状态，且菊花比较容易培养，在配制MS培养基时，             （填“必须添加”或“不必添加”）植物激素。

甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物， 回答下列问题：

（1)为了培养该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用       酶和       酶去除细胞壁，获得具有活力的       ，再用化学诱导剂       诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成       组织，然后经过       形成完整的杂种植株。这种培养技术称为        。

(2)假设甲和乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是       。

(3)这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到

的               等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。

植物细胞工程包括植物组织培养和植物体细胞杂交等技术，植物组织培养是克隆植物的一种方法，回答相关问题：

（1）  植物组织培养依据的生物学原理是______________________________。在一定的营养和激素等条件下，植物细胞可以脱分化形成________，将其转接到含有_________、__________等激素的培养基上，就可以诱导其再分化成胚状体或丛芽。生产脱毒苗应选择_________组织进行培养。

（2）植物组织培养过程需要植物生长和繁殖的最适条件，否则在光学显微镜下可观察到发生______________变异，进而使植株出现遗传不稳定或者不育的现象。

（3）植物体细胞杂交技术的关键环节有

①去除__________________；

②诱导__________________；

③植物组织培养。