生物技术已经渗入到了我们生活的方方面面，例如：

（1）目前临床用的胰岛素生效较慢，科学家将胰岛素B链的第28和29个氨基酸调换顺序，成功获得了速效胰岛素。生产速效胰岛素，需要对___________（胰岛素/胰岛素mRNA/胰岛素基因）进行定向改造，它属于第二代基因工程即________。将改造后的分子导入受体大肠杆菌，一般需要用_______处理大肠杆菌细胞，使之成为__________细胞。

（2）若某对夫妇结婚后发现妻子双侧输卵管堵塞，无奈需进行试管婴儿技术，该技术包括_______________________。（写出两项即可）

（3）连年种植单一品种造成病虫害增加主要违反了____________原理。各种粪便作为沼气发酵的原料，这体现了生态工程的_________________原理。

（1）过程①中将修饰后的CHS基因与Ti质粒连接成重组Ti质粒的酶称为               。这种酶主要有两类，一类是从T4噬菌体中分离得到的，另一类是从大肠杆菌中分离得到的。这两类酶都能恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的                 键。

（2）图中将修饰后的CHS基因导入苦荞体细胞的方法称为                   ，除此外还可以利用的方法有                    。对过程②操作前，需先用Ca²⁺处理农杆菌，使其成为             细胞。

（3）检测转基因苦荞培育是否成功，可以比较转基因苦荞与普通苦荞的

                 含量或测定细胞中CHS含量进行鉴定。

（I）大肠杆菌是与我们日常生活联系非常密切的细菌，请回答有关检测饮用水中大肠杆菌的问题：

（1）检测饮用水中大肠杆菌的含量时，通常将样品进行一系列的梯度稀释，将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，然后记录菌落数量，这种方法称为_____________。判断下面所示的4个菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是__________________。

（2）用上述方法统计样本中菌落数时是否需要设置对照组？__________（填“需要”或“不需要”），其原因是需要判断培养基___________，对于固体培养基应采用的检测方法是将________________的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（3）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________（填“消毒”或“灭菌”）处理；操作者的双手需要进行清洗和________________；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使其内蛋白质变性，还能损伤它的____________的结构。

（4）检测大肠杆菌实验结束后，使用过的培养基及其培养物必须经过________________处理才能丢弃，以防止培养物的扩散。

35.（II）   根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。

AATTC……G

G……CTTAA

为使载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是________。

（3）反转录作用的模板是____________，产物是__________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。

（4）基因工程中除质粒外，________和______也可作为载体。

（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_________________________。

I:下列是与芳香油提取相关的问题，请回答：

（1）玫瑰精油适合用_________________法提取，其理由是玫瑰精油_________________________。蒸馏时收集的蒸馏液__________ （是、不是）纯的玫瑰精油。

（2）蒸馏瓶中的水和原料量比例为_________，蒸馏过程中，影响精油提取量的主要因素有_________________和____________________。

（3）如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会__________，原因是_____________________。

II:Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①中所选的卵母细胞应处于______________期。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其______________分离出ES细胞，ES细胞在形态上表现为____________________的特点。

（3）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的____________________。可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成____________________，利用______________技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有_______________________酶的酶切位点。

（4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag2蛋白的抗体进行________________________________。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

(1)cDNA文库属于_____基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的_____反转录产生的cDNA片段，与________连接后储存在一个受体菌群中。

(2)切割DNA分子的工具是_______________，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的________________断开，形成黏性末端或平末端。

(3)基因工程中所使用的DNA连接酶有两类。既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端的是________DNA连接酶。

(4)如果受体细胞是大肠杆菌，需要用________处理细胞，使之成为感受态细胞，才能吸收DNA分子。

（1）人体组织内的A物质是一种重要的药用蛋白质，可以通过基因工程从母羊的乳汁中获得。获取A基因和载体用________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。将其导入母羊受精卵常用的方法是________。检测目的基因是否插入到受体细胞DNA上，可采取___技术。

（2）在胚胎工程的应用中，为获取更多的卵（母）细胞，要对供体动物注射______，使其超数排卵。从良种的雄性个体采集的精子需要_____后才能进行受精作用。体外受精可以在____或者专用受精溶液中完成受精。

（3）一般当早期胚胎发育到______阶段时，将胚胎移入受体（代孕）个体子宫内断续发育。移植后的胚胎在受体子宫内存活，其生理基础是_______。

（4）蛋白质工程是以蛋白质分子的空间结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过____，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活需要。

（5）我国西北土地沙化和盐渍化非常严重，原因有多种，其中一个主要原因是超载放牧导致草地退化。试分析上述事实主要违背了生态工程的_________原理。