铁皮石斛是一种名贵中药材，有生津养胃、降血糖和增强免疫力等作用，有效成分为石斛多糖、石斛碱等，温州雁荡山素有“中国铁皮石斛之乡”的美誉。请回答下列问题：

（1）用茎快速繁殖铁皮石斛时，给茎消毒时无须使用的是__________ （填“乙醇”，“无菌水”，“甘露醇”或“次氯酸钠”）。在细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基中培养茎的切段，待长出较多的_____________ ，将其进行______________ （处理）后再转入__________培养基中继续培养，直至长成幼苗，之后再后将苗移至草炭土或蛭石中进行___________，再转移至土中定植。

（2）研究发现，铁皮石斛的生长发育与其体内的内生菌密切相关。为进一步研究内生菌的作用，需要大量的内生菌进行相关实验。分离内生菌时采用的最简便的方法是________ 。

A．G6玻璃砂漏斗过滤法              B．血细胞计数法

C．划线分离法                       D．涂布分离法

    再将纯化的内生菌转移到液体培养基中进行_____________ 。

（3）研究发现，质量浓度为200mg /L的卡那霉素能有效抑制铁皮石斛细胞的增殖与分化。科学家欲利用卡那霉素，采用农杆菌转化法对现有铁皮石斛品种进行基因改良。在基因工程操作中，对于要导入受体细胞的_____________ 应同时带有目的基因和_____________ 基因，这样才能利用含有卡那霉素的培养基将成功导入目的基因的受体细胞筛选出来。

（4）鉴定铁皮石斛的品质，可通过苯酚—浓硫酸法测定石斛多糖的含量。其原理是石斛多糖水解成单糖并脱水生成糖醛衍生物后，与苯酚缩合产生橙黄色化合物，在490nm处测定光密度值，以不同浓度的葡萄糖溶液为标准溶液建立标准曲线，便可知道样品中石斛多糖的含量。

（5）为高效提取石斛多糖，可在提取液中加入_____________ ，以提高铁皮石斛的出汁率。

科学工作者将抗虫毒蛋白基因通过载体转入棉花细胞，获得了很好的抵抗棉铃虫的作用。在研制抗虫棉的过程中，利用标记基因，可以快速检查基因表达载体是否导入棉花细胞，然而，即使基因表达载体已经导入棉花细胞，也不能确定转基因过程已经取得成功。因此，在该项工程的最后阶段，需要做如下一系列检测：

（1）用放射性同位素标记的________________________________作探针，可以分别检测棉花细胞中是否有_____________________________________。

（2）向棉花细胞的匀浆中加入特定的________，可以检测棉花细胞中是否能够产生抗虫毒蛋白。

（3）除了上述分子水平的检测外，还需要做个体水平检测。其方法是____________________________________________________________。

（4）我国西北的一些地区年降雨量很小，只适宜种植少数的草本植物，但却被硬性规定种植转基因的抗虫棉，结果造成减产。这个案例主要违背了生态工程的________________原理。

（5）一般来说，生态工程的主要任务是对_________________________________进行修复，对造成环境污染和破坏的生产方式进行改善，并提高生态系统的生产力。

下图为吉林大学农学部奶牛繁育基地成功培育出的一头携带转入赖氨酸基因的克隆牛“织女”的大致过程，请据图回答问题:

北极比目鱼中有抗冻基因，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，请回答：

（1）利用过程①的方法构建的基因文库是________，除了从基因文库中获取目的基因以外，常用的获取目的基因的方法还有________和________。

（2）过程②中常需要使用限制酶和DNA连接酶，既能连接黏性末端又能连接平末端的DNA连接酶是_________________________。

（3）为使过程①获取的目的基因在番茄细胞中能够表达，在构建表达载体时，需要将目的基因插入_____________，并且需在目的基因的首端和尾端分别加入___________、__________。

（4）此题中将目的基因导入受体细胞的方法是_____________。

（5）要检测番茄的DNA上是否插入抗冻基因，应以_______________为探针，与番茄基因组DNA杂交；要确认抗冻基因是否在转基因番茄植株中正确表达，应通过_____________法检测转基因番茄植株中该基因的表达产物是否呈阳性。

下图1表示制备固定化酵母细胞的有关操作和利用固定化酵母细胞进行酒精发酵的示意图，图2是“DNA粗提取与鉴定”相关实验步骤。请回答下列问题：

                              图1                                             图2

(1)图1中，X溶液为_________，其作用是使______________________。发酵过程中用搅拌器搅拌的目的是为了使__________________。

(2)在用海藻酸钠包埋酵母菌形成凝胶珠的过程中，加热溶解海藻酸钠时需注意用_______________加热，然后将溶化好的海藻酸钠溶液____________________后，再加入酵母菌充分搅拌混合均匀。

(3)圈2中，a表示释放核物质后进行过滤的过程，过滤后取_________________（填“滤液”或“析出物”）进行下一步实验；b表示的相关操作过程中，加入2mol/LNaCl溶液的作用是__________；c表示在滤液中加入冷却的95%的酒精，其目的是________________。

（3）DNA粗提取时，常用鸡血作为实验材料，原因是______________________________。实验中有两次使用蒸馏水，第一次使用的目的是________________________________ 。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）cDNA文库属于     基因文库,其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的       通过反转录产生cDNA片段,与        连接后储存在一个受体菌群中.

（2）切割DNA分子的工具是           ，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的            断开，形成黏性末端或平末端。

（3）基因工程中所使用的DNA连接酶有两类。既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端的是       DNA连接酶。

（4）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是           ；如果受体细胞是大肠杆菌,需要用          处理细胞,使之成为感受态细胞,才能吸收DNA分子.

43、萝卜贮藏根组织细胞中是否存在蛋白质和DNA？某生物小组对此进行了研究。他们查阅了有关资料得知：①蛋白质在lO％NaCl溶液中可沉淀析出；②在蛋白质溶液中，加入双缩脲试剂，溶液呈现特有的颜色；③DNA溶于10％NaCl溶液，但在95％酒精中呈白色絮状沉淀析出。请你根据所提供的条件参与实验设计并回答问题：

实验材料：白萝卜。

实验用具：粉碎机、烧杯、漏斗、试管、滤纸、玻棒、镊子、载玻片、天平、纱布。

实验药品及试剂：蒸馏水、NaCl、95％酒精、甲基绿染液、双缩脲试剂、蛋白质标准样品。

(1)材料处理：称取50 g             洗净切块，加水30 mL，用粉碎机粉碎，将匀浆经纱布过滤。

(2)提取：①向经纱布过滤得到的滤液中加入                 直至沉淀析出。经滤纸过滤，将滤纸上的沉淀物放入试管中，加入1mL蒸馏水，振荡，用于           鉴定。②除去蛋白质的滤液中，加入        ，用玻棒轻轻搅拌，有白色絮状沉淀产生。经滤纸过滤，用镊子将滤纸上的絮状沉淀置于载玻片，用于             鉴定。

(3)鉴定及结果：

①在用于蛋白质鉴定的试管中，加入双缩脲试剂产生紫色反应；说明                             

②在用于DNA鉴定的载玻片上，滴加             染液，白色絮状沉淀呈现蓝绿色， 说明                                 。

③通过对白萝卜贮藏根匀浆液的检测，说明                               。