微生物强化采油(MEOR)是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油黏度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。以下是人们筛选、纯化和扩大培养该类微生物的实验操作。请回答下列问题：

(1)土壤是微生物的大本营，该类微生物应取自___________________________的土壤。

(3)接种后，应密封培养的原因是________________，培养一段时间后在培养基上形成降油圈，此时选取___________就可获得高效菌株。

(4)扩大培养过程中需要对微生物进行计数。取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220。则样品中微生物的数量为____________个／mL。该统计结果_________(填“低于”或“高于”)实际值。

分析回答下列有关微生物的问题。

Ⅱ．下表是某微生物培养基成分，据表回答下列问题。

（1）上述培养基所培养微生物的同化作用类型是________，判断依据是____________。

（2）若培养从土壤中分离出来的自生固氮菌，该培养基成分如何调整？___________________。依据是___________________________________________。

（3）若表中培养基用于观察菌落形态，应增加的成分是________。

Ⅲ．在充足的碳源、氮源、无机盐和水的条件下，某些微生物仍然不能正常生长，还需要在培养基中添加________。

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离这种酵母菌。操作如下：

(1)制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是______________________________________。获得纯净培养物的关键是____________________。

(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是__________________________。划线的某个平板经培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是______________________________。

(3)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一________的固体培养基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌__________。实验中所用培养基按功能属于__________培养基。

(4)若要检测土样中的酵母菌含量，应采用__________________法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是______________________________。然后，将1 mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，各在3个平板上分别接入每种稀释度的稀释液0.1 mL，经适当培养后，6个平板上的菌落个数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为____________个。

    （1）配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的____________和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要进行的操作是__________。

    （2）接种微生物的方法有很多，图1中过程①②③所示的方法为___________________。用该方法统计样本菌落数后，所得数据需要乘10ⁿ后，才可表示乳酸菌的数量（单位：个/mL），这里的n＝________________。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是_______________________。

    （3）为了检测乳酸菌对抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A、B、C三种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含抗生素A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A___________（填“敏感”或“不敏感”）；含抗生素C滤纸片周围的透明圈比含抗生素A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是____________。

(3)该实验小组对乳酸菌接种所采用的方法是___________________。根据酸奶样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的__________；根据三个平板中菌落数，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为_________个／mL，该方法测定的乳酸菌的含量和实际值相比，一般________(填“偏大”或“偏小”)。

(4)为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是______________________________。

农业生产上有一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解,长期使用会污染土壤。为修复被污染的土壤,可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌。已知该除草剂(含氮有机物)在水中溶解度低,含一定量该除草剂的培养基不透明。请回答下列问题:

(2) 在选育过程中,应将出壤浸出液接种于以____为唯一氮源的固体培养基上。为了筛选出高效的目的菌,可比较单菌落周围透明圈的大小。实验结果如图显示的A~E五种菌株中,____是最理想菌株。 

(3) 若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数,可采用的接种方法是___________。对分离的细菌数目统计时,统计的菌落数目往往比活菌的实际数目____。 

(4) 操作过程中有三种材料或用具需要消毒或灭菌:①培养细菌用的培养基与培养皿;②操作者的双手;③玻璃棒、试管、烧瓶和吸管。其中需要灭菌的是____(填序号)。