为了调查某学校附近河流的水质状况，该学校生物兴趣小组测定了河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：

（1）如图，该小组采用的是_______________分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_________灭菌，在第二次及以后的操作时，总是从上一次的末端开始，这样做的目的是____________________________________。

（2）该实验组将接种好的培养皿在恒温箱中培养时倒置，其目的是_________________________；在培养基上产生的单个菌落在生态学中可以被称为 __________________。

（3）根据培养皿上菌落的平均数可以计算河水中该细菌的密度，但计算的数据要比实际活菌的数目少，原因是_____________________________________。除了上述的活菌计数法外，______________也是测定微生物数量的常用方法。

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：________________

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________________________；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37, 据此可得出每升水样中的活菌数为___________。

（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过___________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_____________________________________________________。

（3）示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

 （4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。

（一）酵母菌是日常生产和生活中应用极其广泛的一种微生物。下图是有关酵母菌的实验操作。请据图回答：

(1)实验中试管用滤膜（封口膜）封住，其目的是___________________________，A和C过程所采用的接种方法分别是______________和______________。

(2)为了扩增酵母菌，可将经D过程接种后的三角瓶置于______培养一段时间，若要测定三角瓶中酵母菌的细胞数，可借助显微镜和血细胞计数板进行计数，下列操作不正确的是____（A.压在方格线上的细胞只计左线和上线上的酵母菌数  B.用滴管取1滴培养液到血细胞计数板的方格区，盖上盖玻片进行计数 

C.如果酵母菌有芽体，因为没有分离成两个子体，要以一个计数 D.计数方格内酵母菌总数应不少于300个）。

(3)G过程利用酵母菌进行果酒制作，为适当提高果酒的生产速率，进气口应____________，制作好的果酒，还可继续生产果醋，用果酒制作果醋的原理是__________________________（写化学反应式）。

（二）玉米自交系（遗传稳定的育种材料）A具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需进行一系列试验。部分试验如图所示。

（1）为防止酶切产物自身环化，构建重组DNA分子需用2种限制性核酸内切酶，选择的原则是____。

①Ti质粒内，每种限制性核酸内切酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个粘性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个粘性末端序列相同

A．①③         B．①④        C．②③       D．②④

（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是__________，自交系_____的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体，用愈伤组织做受体细胞是因为其细胞表达___________的能力强，图示目的基因导入受体细胞的方法是_____________。

（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含________的选择培养基。

（4）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K处理后出现蓝色的愈伤组织可能是无农杆菌附着的转化愈伤组织或________________________。

(2)在制备杨梅醋过程中，乙罐内填充的木材刨花应先经__________处理，然后加入含___________菌的培养液，使该菌附着在刨花上，再让甲罐中发酵完毕的杨梅酒流入乙罐进行杨梅醋发酵，请写出乙罐中生产杨梅醋的化学反应方程式_______________________。

(3)为了提高杨梅酒和杨梅醋的品质，更好地抑制其他微生物的生长，需向相应的发酵罐中加入优良的菌种。从野生菌群中分离纯化优良菌种时，最常用的接种方法有____________和____________。

下表是一种细菌培养基配方，请回答下列问题：

（1）该培养基的葡萄糖为微生物的生长繁殖主要提供               。

（2）该培养基属于              培养基（多选）。

A．液体     B．固体      C．鉴定      D．选择         E．天然

（3）如果要对培养基的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行            。

（4）制备培养基的操作步骤是                 。（用下列字母排序）

a．倒平板     b．计算    c．溶化   d．称量    e．灭菌

A．a→b→c→d→e                          B．e→b→d→c→a      

C．b→d→c→a→e                       D．b→d→c→e→a

（5）某同学用稀释涂布平板法测定一个土壤样品中的细菌数（取10克该土壤加90ml无菌水制成稀释液）。在对应稀释倍数为10^​6的培养基中统计3个平板上的菌落数分别为：121、212、256，则每克该土壤样品中的菌落数为            。

注：“-”表示不产气；“+”表示产气，“+”越多产气越多。 
分析回答：

（1）酵母细胞中能产生CO₂的场所是             。（2分）步骤①恒温培养箱的温度控制在 20℃左右，其主要目的是              。（2分）

（2）步骤②中，发酵液应使用       进行梯度稀释。稀释涂布平板法依据的原理是在稀释度足够高的菌液里，将聚集在一起的菌种分散成       ，从而能在培养基表面形成单个菌落。“一个菌落”在生态学中属于一个          。

（3）步骤③平板划线时，每次划线前后都要用     法对接种环进行灭菌。在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，原因是      。（2分）

（4）根据实验结果推知，            （品种）是较理想的酿酒菌种。

(1)柚皮易焦糊，宜采用________法提取柚皮精油，新鲜的柚皮干燥去水并用________浸泡处理，该过程得到的糊状液体可通过________除去其中的固体杂质。

(2)培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度________。

(3)抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

(4)柚皮油也可用萃取法来提取，原因是________。分析上图，提高萃取效果的方法是________、________。

某化工厂的污水池中含有一种有害的、难以降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基成功筛选到能高效降解化合物A的细菌。实验的主要步骤如下图所示，请分析回答：

(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选________，这种培养基属于________培养基。不论何种培养基，在配制是要进行调整________，在接种前要用_______       

对其灭菌。倒平板时，一般需冷却至________左右，在________附近操作

(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________。实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是________。

(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量__________的培养基，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量________。

(4)转为固体培养时，常采用________或__________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

(5)实验结束时，使用过的培养基应该进行__________处理后，才能倒掉。

科学家采用“影印培养法”研究微生物的抗药性突变是自发产生的还是在环境因素的作用下产生的。具体操作步骤如下：

①首先将大量对链霉素敏感的大肠杆菌涂布在不含链霉素的培养基平板1上，待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基平板2上，随即再影印到含有链霉素的培养基平板3上。经培养后，在平板3上出现了个别抗链霉素的菌落。

②对培养皿2和3进行比较，在平板2上找到与平板3上相对应的抗性菌落，挑取其中一个菌落接种至不含链霉素的培养液4中，经培养后，再涂布在平板5上。

③重复以上各步骤，最后在试管12中获得了较纯的抗性菌落。

根据以上材料回答下列问题：

（1）若要获得抗链霉素的大肠杆菌，实验设计思路是：____________________。

（2）大肠杆菌抗链霉素基因存在于________上，该结构在基因工程中是最常用的载体。

（3）3号、7号、11号培养皿中加入链霉素的作用是____________________，3号培养皿中的菌落比1号、2号中的菌落少很多，这说明_____________________。

（4）该实验结论是：_________________________________________________，依据是_______________________________________________________________。

临床实验表明，服用乳酸菌及其制品具有减少人体血清胆固醇含量、降低心脑血管发病率的功效。下面是从酸奶中筛选出高效降低胆固醇的乳酸菌的实验，请回答下列问题：

（1)制备固体培养基(MRS)：在普通的液体培养基中添加碳酸钙和         ，加热使其熔化，然后转移到锥形瓶中。经高压蒸汽灭菌法处理后，待其冷却至            ℃左右，在                    附近倒平板。

(2)将少量酸奶制成1:10稀释液，再将梯度稀释到10^－6的稀释液涂布于添加了碳酸钙的乳酸菌培养基(MRS培养基)平板上，在             (填“有氧”或“无氧”)条件下 37 ℃恒温培养72 h。挑取               (填“有”或“无”)溶钙圈(或透明圈)的菌落，用       法接种在MRS培养基上反复纯化至纯种备用。

(3)在普通的MRS液体培养基中添加适量                  并用超声波振荡乳化20 min，调PH至7.0，然后将纯化后的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养，一段时间后用特定显色剂分光光度法离心测定上清液中            的含量，以                 作为对照，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出目的菌株。